建立高敏感度快速之新興H7N9流感病毒分子檢測技術

中國大陸在2013年3月爆發人類新興H7N9 流感疫情，截至目前為止已經造成120餘案例感染，死亡率高達20%以上，還有許多重症病患仍在治療中，而且感染人數仍然不斷攀升。台灣與大陸地區交流頻繁，2013年 4月23日台灣也已經出現首例境外移入的新興H7N9案例。雖然目前沒有證據顯示禽流感病毒會造成人傳人，但是這些流行的訊息顯示禽流感病毒對人類已經是一種新型流感病毒，隨時有可能在人類爆發大流行。而台灣又處於好發禽流感病毒大流行的東南亞地區，迫切的需要在實驗室中建立一套快速、高敏感度的新型流感病毒鑑定技術，來即時的檢測這些新型流感病毒感染人類的情形，以便給予最適當的醫療處置，做最有效的疾病管控及防疫處置。目前資料顯示新興H7N9病毒對於該病毒對Tamiflu克流感藥仍具有感受性，因此極需設立一高敏感度的檢測方法來快速鑑定此新興H7N9病毒，及早給予病人克流感治療。Real-time RT-PCR分生技術是目前已知最敏感且快速的病原菌的檢驗技術， WHO也於4月中旬公告用於檢測新興H7N9之Real-time RT-PCR技術，但是根據我們實際評估發現敏感度不佳，其所設計的引子對於現在已知的病毒核甘酸序列有部分不一致，可能導致敏感度下降，對於低病毒量感染的檢測恐發生偽陰性反應，台灣個案也是採用WHO技術，但卻是在第三次採檢才測出新興H7N9病毒，顯示病毒檢測技術確實有必要重新評估與設計。因此在本計劃中，我們將完成下列的研究： 我們預計比對公布於GISAID資料庫中所有H7N9感染案例的病毒基因序列，建立多型即時反轉錄聚合脢連鎖反應(Multiplex real-time RT-PCR)技術，以流感病毒血凝素（HA，haemagglutinin）、神經氨酸苷酶(NA，neuraminidase）及PB2基因為標的區域，找到最佳的引子套組(primer/probe)，設計出高敏感度和高度特異性的real-time RT-PCR聚合酶鏈反應平台，同時鑑定Influenza A、Influenza B及A之亞型(H1,H3,H5,H9,N9)，期望能快速且有效率的檢測新興H7N9的感染，讓臨床醫師在第一時間讓H7N9感染的患者提早用藥，減少重症或死亡案例，並協助新興H7N9疫情的監測與防治。在完成最佳化反應條件後，我們也將評估此方法的實際操作所需時間與費用，以利將來實際推廣與應用。

Project ID:PG10209-0040
External Project ID:MOHW-TD-B-111-D004