An Amyloid Disease Model Induced by Viral Transfer of Βeta-Amyloid Protein Gene and Its Application

  • Chen, Shun-Sheng (PI)
  • Chen, Tsan Ju (CoPI)

Project: National Science and Technology CouncilNational Science and Technology Council Academic Grants

Project Details

Abstract

β-類澱粉蛋白 (約39-400 胺基酸長)常發現在阿滋海默症及包含體肌炎病人的腦及肌肉組織裡發生堆積。研究顯示β-類澱粉及β-類澱粉前驅蛋白的堆積可能為導致類澱粉相關疾病的重點病因。除此之外,也有越來越多的證據證實β-類澱粉和β-類澱粉前驅蛋白在阿滋海默症和包含體肌炎的上游或中游病理機轉裡扮演了重要角色,並使下游產生一些副作用如異常的細胞訊息傳導、基因改變、氧化作用的導入和腺粒體的異常等等,但是其真正的病理機轉目前並不太清楚也不確定。過去幾年來計劃中對類澱粉疾病研究的投入,我們的正完成建立了一類似包含體肌炎的細胞模式並用此來規範它的可能的病理機轉。 但我們也注意到其他研究指出β-類澱粉前驅蛋白基因過量表現可導致的肌纖維的空泡化或腦細胞間的β-類澱粉包含體;所以,此基因也為研究類澱粉疾病一相當重要因素。最後,我們深知假如我們要寬廣我們的研究視野,實驗室裡的基因的分生理念必須事先建立。 以β-類澱粉前驅蛋白基因過量表現和堆積的病理現象為標準並企圖再建立的包含體肌炎和阿滋海默症細胞模式,我們將設計以基因改造過的慢病毒(Lentivirus)為β-類澱粉前驅蛋白基因傳導媒體為此年度計劃。目前雖然有幾許實驗也曾經作過與此類似的方法, 我個人強烈認為以基因病理機轉研究為主的阿滋海默症及包含體肌炎是相當重要的,並且也值得在我們的實驗室伸根和操作,而使得類澱粉疾病相關研究能更有寬敞的空間。本實驗時間將為期一年,其做法為β-類澱粉前驅蛋白基因的cDNA 利用PCR 的方法從人腦cDNA 圖書館分離出來並保存於-20 度的冰箱裡,然後後送作DNA 定序、Cloning、細菌轉染及載體純化等步驟。純化出的病毒載體將送至293FT 細胞來製造慢病毒。利用萃取法的方式選出適當的慢病毒數量並最後用來做肌肉和神經細胞的轉染。經轉染後的細胞我們將以西方墨點法、螢光顯微鏡和電子顯微鏡來評估與觀察β-類澱粉前驅蛋白基因的表現,並假設此蛋白的大量表現將使我們的腦與肌細胞產生β-類澱粉包含體如阿滋海默症及包含體肌炎病的病理特徵。

Project IDs

Project ID:PC9506-0153
External Project ID:NSC95-2314-B182-023
StatusFinished
Effective start/end date01/08/0631/07/07

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