Differential Influenza a Viral Gene Expressions in Different Host Cells---Mechanism Study of Interspecies Infection (I)

這個計劃想要探討A 型流感病毒跨越宿主感染的機制，特別是禽流感如何感染人類。除了基因互換(reassortment)這個機轉之外，禽流感可能藉由自發性的點突變累積而改變病毒的特性，因而跨越宿主，感染到人。這些自發性的點突變累積可能在以下兩方面影響病毒的特性，(一)突變導致表面醣蛋白血球凝集脢(HA)與宿主細胞受體結合位置之結構有所變化，使得禽流感病毒容易與人類細胞結合，(二)突變導致禽流感病毒可以在人類細胞中有效率地複製。我們這個計劃主要是研究第二項。我們想要瞭解在病毒RNPs, 包括聚合脢(PB2,PB,及PA)和核蛋白(NP)上所謂的〝物種相關〞之胺基酸序列在禽流感病毒跨越宿主感染至人類細胞的角色。病毒RNPs 功能將在人類細胞或禽類細胞中被測試。我們將測試的RNPs功能包括病毒基因之複製，轉譯以及M1 mRNA 選擇性基因剪接(Alternativesplicing)之調控。含有特殊序列的病毒RNA，例如5 端及3 端之vRNA，cRNA，mRNA(含cap 或無)將被加入系統中以測試病毒RNPs 不同之功能。我們亦會在PB2,PB1, PA 及NP 上做出不同組合之突變，並檢測這些突變對RNPs 在不同物種的細胞中功能是否不同。我們將以pol Ⅱ promoter 活化之質體載以PB2, PB1 ,PA及NP 進入細胞，同時含有病毒特殊基因序列及CAT 基因, 以pol I promoter活化之載體將亦被送入細胞中當作reporter gene。以此系統，我們將可以檢測各種不同的病毒RNPs 在不同的細胞中對病毒基因表現的影響。在這個計劃中，我們亦將檢視流感病毒M1 mRNA 在不同宿主細胞中發生選擇性基因剪接的情形。不同的組織來源的細胞中有不同含量的〝選擇性基因剪接因子，例如ASF∕SF2。因此，我們相信研究M1 mRNA 在不同宿主細胞中基因剪接如何被調控是相當有意義的，這個方向的研究可能也會提供A 型流感病毒在不同物種宿主細胞中基因表現與調控的訊息，進而有助於瞭解流感病毒跨越宿主感染之機制。

Project ID:PC9508-2264
External Project ID:NSC95-2745-B182-011