Effect of Catechin on the Secretion of Testosterone from Rat Leydig Cells

  • Wang, Shyi-Wu (PI)

Project: National Science and Technology CouncilNational Science and Technology Council Academic Grants

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Abstract

茶在中國人的生活史上佔有一席重要的地位,茶亦是人類日常生活中不可或缺的食品之一; 在國外尤其是英國,午茶是休息時間的重要飲料。古人已知茶可潤喉、止渴、解酒,近來日本學界更發現茶可防癌治病,但多數僅限於綠茶;化學分析發現兒茶素( catechin ) 為綠茶中的主要成分,諸多研究報告均指出兒茶素具有抗氧化的能力,可抑制癌細胞的生長,防止細胞突變並可預防皮膚癌的發生。兒茶素對生殖內分泌影響之研究報告則是結果互有矛盾;Kao,et al.,指出ip 注射(-)-epigallocatechin gallate (EGCG)—茶中的另一成分,可抑制大鼠血中睪固酮、LH、及雌二醇,而口服無效;Satoh, et al.,則指出口服茶葉翠取物catechin 可有效的刺激大鼠血中睪固酮、TSH、及LH。但兒茶素如何刺激睪丸Leydig 細胞合成睪固酮之能力及其訊號傳導機制均屬未知。本實驗室之前導實驗顯示於大鼠活體試驗,兒茶素,epicatechin,及EGCG 以1μg/ml/Kg iv於雄鼠,血漿睪固酮濃度8 小時後均有顯著升高(Fig. 1. & 2.);於離體試驗之interstitial cells 或Leydig cells 兒茶素,epicatechin,及EGCG 可增強hCG刺激睪丸Leydig 細胞合成睪固酮之能力(Fig.3. & 4)。本研究計劃之目的在探討兒茶素對睪丸Leydig 細胞之作用機制。為達此目的,本計劃有兩個主要目標:第一:探討兒茶素對睪丸Leydig 細胞分泌睪固酮之影響;第二:探討兒茶素影響睪丸Leydig 細胞分泌睪固酮之訊號傳導為何?此研究將包括使用PKA,PKC,及鈣離子通道之抑制劑、類固醇激素的前驅物、及西方墨點法來分析兒茶素在睪丸Leydig 細胞內其訊號傳導路徑為何?包括:﹝1﹞睪固酮之活體分泌,﹝2﹞睪固酮之離體分泌及合成;在探討機轉方面,將使用IBMX,forskolin,SQ22536,8-Br-cAMP 及nifedipine 探討cAMP及鈣離子在調節睪丸Leydig 細胞分泌睪固酮之角色。另外給予一些類固醇激素的前驅物, 如: 25-OH-cholesterol, pregnenolone,及progesterone,以探討類固醇激素合成酵素的活性是否會受到兒茶素、epicatechin,、EGCG 的影響;同時利用西方墨點法(Western blotting)來探討類固醇激素合成酵素及StAR 蛋白質的表現。實驗將以下列步驟分兩年進行:第一年:﹝1﹞由國科會動物中心購得之Sprague-Dawley(SD)種系之雄鼠,飼養長庚大學動物中心數日後,經由靜脈插管注入兒茶素、epicatechin,、EGCG,人絨膜性促素(hCG,human chorionicgonadotropin),及人絨膜性促素+ 兒茶素、epicatechin,、EGCG;定時採血,取得血漿後,用乙醚萃取,再以放射免疫測定法(RIA,radioimmunoassay)檢測睪固酮之濃度;﹝2﹞將雄鼠睪丸Leydig 細胞與兒茶素、epicatechin、EGCG,人絨膜性促素, IBMX, forskolin, SQ22536, 8-Br-cAMP, nifedipine,25-OH-cholesterol, pregnenolone,及progesterone,等同時培養1 小時,收集上清液及細胞,以RIA 檢測培養液中睪固酮及細胞內cAMP 的濃度;第二年:﹝3﹞兒茶素、epicatechin、EGCG 與3H-cholesterol,3H-pregnenolone,或3H-progesterone 一起加入細胞培養液中, 以薄層分析法(thin-layerchromatography, TLC)分析類固醇激素合成酵素的活性;﹝4﹞同時以西方墨點法探討兒茶素等物質對類固醇激素合成酵素及StAR 蛋白質的表現。所有數值均將以統計分析其差異性。此研究計畫的完成必將有助於瞭解兒茶素對睪丸Leydig 細胞合成分泌睪固酮之影響及其作用機制,而以此結果為基礎,希望能對男性內分泌之臨床醫療工作有所助益。

Project IDs

Project ID:PC9408-1384
External Project ID:NSC94-2320-B182-022
StatusFinished
Effective start/end date01/08/0531/07/06

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