Elucidation of Distinct Mechanisms by Which Drosophila Cbl Isoforms Downregulate Egfr Signaling

Cbl 家族的蛋白質利用受體的內噬及降解作用去降低EGF 受體的訊息傳遞，這類的蛋白質包含了兩個功能區；一個是含有E3 接合.的RING finger 區，另一個則是具有聚合作用的多proline 區。果蠅的Cbl 蛋白基因能夠產生兩種異形物分別是D-CblS 和D-CblL，這兩種均含有RING finger 區，但D-CblS 則沒有多proline 區。我們證實這兩種D-Cbl 的異形物的表現都能夠起死回生讓沒有D-Cbl 的突變果蠅存活下來，或是改善果蠅Egf 受體的過度活化的特徵，這個結果暗示這兩種D-Cbl 的異形物都能抑制Egf 受體的訊息傳遞。有趣的是，當我們刻意大量表現D-CblL 在某些組織時，會去抑制Egf 受體經常性活化的影響並表現出Egf 受體訊息傳遞過低的特徵，這種情形在D-CblS 中則不會出現。這個結果暗示D-CblL具有負調控Egf 受體訊息傳遞的主導權。此外，當dynamin 的功能降低時，D-CblL在濾泡細胞中的影響力也隨即減少，這個結果暗示D-CblL 是藉由活化的受體的內噬作用來達到降低訊息傳遞的結果。另外，D-CblL 主要是表現在細胞質內成點狀分佈，而D-CblS 則是在濾泡細胞質的外圍。因此D-CblS 和D-CblL 應該是用兩種不同的方式去負調控Egf 受體。這個構想書最主要是要去探究這兩種D-Cbl 的異形物負調控Egf 受體訊息傳遞的機制。我們將利用遺傳的方式將含有不同點突變的D-CblL 表現在果蠅中，然後去研究這種果蠅是否能夠存活下來並改善原有癥灶。另外，遺傳的交互作用法也會被使用來區別這兩種D-Cbl 異形物所導致的內噬作用。我們也會利用免疫沉澱法及質譜分析法來找尋參與在這兩種途徑中的分子。同時，免疫染色及穿透式電顯則會被使用來區分兩種D-Cbl 異形物在細胞內所使用的運輸途徑。總之，對於D-Cbl 在調控EGF 受體的訊息傳遞的機制的瞭解，可以提供我們很好的策略去治療和改善在人類中與EGF 受體訊息傳遞有關的疾病。

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