Interaction between Nebulin and Other Muscle Proteins

  • Chin, Lan (PI)

Project: National Science and Technology CouncilNational Science and Technology Council Academic Grants

Project Details

Abstract

Nebulin 是分子量 700-900 KDa 之巨大肌肉蛋白 質,文獻中所有nebulin 之資料都是以 denature 方 式純化的 nebulin 所產生的抗體去做 labelling study 或是去鑑定 cDNA clones.分生方法所表現出的小fragment 也用來做功能研究.由於nebulin 經 denature 再renature後的結構性質與 native nebulin 迥異,而分生方法所得小fragment 之大小又僅 nebulin 之數百分之一至數十分之一,所以現有的 有關nebulin 之性質都不能盡信.我們目前已發展 出一套不加 denaturant 之純化 nebulin 之方法,以 得到完整的 nativenebulin 分子.並且已確定一個 nebulin 分子可結合一百個以上的G-actin.本計劃 的第一個目標就是精確決定 nebulin 與G-actin 之binding stoichiometry,以求出 nebulin 之每一個actin binding domain 是由多少個 sequence module 構成.然後 能推測二者之間的結合模式.此外, co-sedimentation 實驗結果也顯示 nebulin 會使 G-actin 在其 monomer buffer (G buffer) 中依 nebulin 分 子而聚合.所以本計劃之第二個目標就是以螢 光和散射方法求證這個現象,並在同樣實驗中 加入 tropomyosin 或 (和) troponin,以觀測這兩種 thinfilament 蛋白質是否影響 nebulin 與 actin 之作 用.本計劃之第三個目標是以 co-sedimentation, ELISA-mediated protein binding assay和fluorescence 三種 方法探討 tropomyosin,troponin 和 myosin 能否與nebulin 作用.如果 myosin 與 nebulin 有作用的話,還 將進一步鑑定 myosin 分子與 nebulin 之結合部位 是在其球狀體還是棒狀體.由以上研究之結果, 我們可以建立一個有精確數字根據的nebulin 與 actin 作用模式.也有了紮實的基礎來提出 nebulin 為骨骼肌細胞內actin 聚合之 template 之假 說.澈底探究 nebulin 與其他肌肉蛋白質之作用 與否可開啟未來有關其作用 mechanism之研究,有 助於建立新的肌肉收縮及調節模式.

Project IDs

Project ID:PB8503-1124
External Project ID:NSC85-2331-B182-045
StatusFinished
Effective start/end date01/08/9531/07/96

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