Mass Spectrometry-Based Clinical Proteomics---Preparation and Analysis of a Protein Standard for Quantitation

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Abstract

利用二維電泳分離輔以膠體染色定量,是定量蛋白質體學的一個主要方法。質譜儀在此所扮演的角色,主要在於蛋白質身份鑑定。但在有適當標準品存在下,質譜儀也具有突出的定量功能。近年來,利用質譜儀定量差異表現蛋白,已儼然成為蛋白質體學研究的一項主流。利用質譜儀定量的原理,主要是藉由安定性同位素標定,將所要比較的兩組樣品,標定不同質量的同位素,如: 1H/2D,12C/13C 等,再將標定後的兩組樣品混合,經過電泳分離、trypsin水解及質譜測量後,最後再以質譜圖中相對標定物之訊號強度比值定量,即可獲得具有差異表現量之蛋白的資訊。對於臨床的檢體,目前只能以化學反應的方式進行標定,才能以質譜儀進行定量。市面上並沒有適當的標準品,可以在樣品不做任何處理的情況下進行質譜定量。本計畫的目的,在於發展出一套同位素標定蛋白標準品的製備方法,針對蛋白的methionine氨基酸進行同位素標定,並保有其原來的化學結構,如此便可以在樣品不須再經化學標定的情況下,進行質譜定量。為克服methionine在蛋白中出現的機率偏低的問題,我們亦將建立專一性純化含有methionine之peptide的系統,及後續配套的質譜分析方法。最後,本分析平台的建立將對臨床樣品中疾病標幟分子的找尋,提供另一種方法學上的選擇。

Project IDs

Project ID:PC9508-1893
External Project ID:NSC95-2320-B182-056
StatusFinished
Effective start/end date01/08/0631/07/07

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