Modulated Hepatic Endothelin-1, Nitric Oxide and Fibrosis Factors of Bile Duct Ligation Rats by Leptin

肝纖維化的行成是多種因子及多階段的步驟。不同的原因引起肝臟受損，刺激肝臟中的星狀細胞(stellate cell, HSC)轉化。星狀細胞的活化引起第一型前膠原蛋白(procollagen type I)的表現；其他，如轉化生長因子（transforming growth factor-β）、爾發平滑肌動蛋白(α-smooth muscle actin)的表現，都在肝纖維化上扮演了重要的角色。活化的星狀細胞刺激內皮素(endothelin)-1的分泌，加上肝內內皮型一氧化氮(endothelial nitric oxide synthase)合成減少，使肝內血管調控機制受損，也會導致門脈高壓症的出現。近年來對於瘦體素的研究延伸至肝臟生理病理機制的探討。瘦體素基因剔除的小鼠對於T細胞藉導的肝炎有明確緩和的證據。相反地，同樣是瘦體素基因剔除卻加速內毒素引發小鼠的肝損傷與死亡率。除此之外，與脂肪細胞分化有關的轉錄因子-溶脢增殖活化受體(peroxisomal proliferartor-activated receptor)-γ在不活躍的星狀細胞會表現。然而，溶脢增殖活化受體-γ在肝纖維化卻表現下降，因為這層關係開啟本實驗探討，瘦體素對上述所提及影響星狀細胞增殖的因子表現做深入的探討。以膽道結紮(bile-duct ligation)手術使大鼠產生肝纖維化。術後第21天到第27天，實驗動物在清醒狀態下，連續7天給予單一劑量瘦體素(0.1、 0.25、0.5 mg/kg body wt, 腹腔注射)或生理食鹽水的注射。第28天，動物在麻醉狀態下測量血壓、心跳、門脈壓、上腸系膜動脈血流速。在測量完生理參數變化後，收取血清做一氧化氮代謝物(nitrite/nitrate)、內皮素-1與腫瘤壞死因子(TNF-α)的分析。所有實驗動物皆收取肝臟組織，部分作為病理組織切片，部分則以西方印漬法（Western blotting）對eNOS、內皮素-1受體A 與B及爾發平滑肌動蛋白做半定量的測定。並且以RT-PCR同時分析肝臟組織中轉化生長因子β1、第一、三型前膠原蛋白、組織抑鐵蛋白與溶脢增殖活化受體-γ，α，δ mRNA的表現。另外，為了進一步瞭解瘦體素對肝纖維化的調控，本實驗也以EMSA分析核因子NF-κB的表現。本實驗的初始目的，在評估瘦體素對肝纖維化大鼠肝內阻力所可能產生的作用。目前我們有幾個新發現的證據值得本實驗往下進行：一，瘦體素可以降低肝纖維化鼠轉化生長因子β1的mRNA 表現；另一方面，瘦體素的補充也可以逆轉肝內溶脢增殖活化受體-γ mRNA低落的情形。第二，瘦體素可以提高肝纖維化大鼠肝臟內一氧化氮的含量。第三，一週的瘦體素治療可以有效緩解門脈高壓的現象。透過本實驗的執行，我們期待不僅僅是探討瘦體素對膽汁鬱滯所引起肝纖維化的調控機制，同時透過更多的實驗證據來加強我們對慢性肝疾病能有更多科學的思維。總之，本計畫預期可增進吾人對reveratrol 和其它polyphenols 在體外的穩定性及其氧化機制的瞭解。對於往後利用體外的細胞試驗，來研究這些polyphenols 時，本研究可能提供避免resveratrol 或其它polyphenols 在培養基中氧化或產生干擾的方法。同時對resveratrol 在低濃度可作為能量限制模仿劑，但是在高濃度卻反而有害的現象提出解釋。此外，在研究中所建立之sirtuin 活性的測定方法，未來則可用來選篩其它可能的能量限制模仿劑及用來探討細胞老化的機制。

Project ID:PC9404-0002
External Project ID:NSC94-2314-B182-024