Molecular Analysis of Enterovirus 71 Replication by Yeast Two-Hybrid

腸病毒71型屬於微小RNA病毒科的一種，腸病毒感染細胞後誘導細胞產生一系列的變化：磷脂質的增加、阻斷ER到Golgi complex的蛋白分泌、誘導細胞內膜發生重組以形成」複製複合體」和細胞內鈣離子的改變。目前已知有那些腸病毒蛋白分子參與上述變化，但造成的機轉並未釐清。有學者提出假說，認為許多病毒感染所造成的病因，可能是由於病毒與宿主的蛋白分子相互作用造成的結果，但與病毒相互作用的宿主蛋白分子被發現的不多。我們實驗室一直對病毒與宿主的蛋白分子相互作用有深入研究：複製複合體的形成需要病毒非結構型蛋白2C的協助，非結構性蛋白2C位於複製複合體內。我們發現腸病毒71型2C蛋白會與宿主蛋白分子Reticulon 3 (RTN3)相互作用，在腸病毒71型感染宿主細胞後，RTN3靠著與2C蛋白的直接相互作用而座落在複製複合體內，我們發現2C蛋白與RTN3相互作用的區域正是與複製複合體相互結合的區域，RTN3是以其第69到第168個胺基酸與2C蛋白的第25個胺基酸isoleucine相互作用。RTN3亦會與小兒麻痺病毒和克沙奇病毒A16型的2C蛋白作用，所以RTN3可能亦會參與其他小RNA病毒的RNA複製。利用siRNA的技術將RTN3做gene silencing，則病毒RNA和蛋白合成會受到抑制；如果重新轉殖RTN3，則可以增加感染力和dsRNA和病毒蛋白合成。此一現象可能是因為雙股RNA的複製受到抑制，進而影響病毒的複製。基於上述理由我們推斷在宿主細胞的RTN3可以調控病毒的複製，未來我們將進一步深入瞭解其作用機制。首先，因為小兒麻痺病毒2C的第25個胺基酸isoleucine是參與(-)RNA的複製，我們要探討RTN3knockdown cell是否是因為(-)RNA的複製受到抑制，進而影響雙股RNA的複製及蛋白合成的能力，以證明RTN3是否參與(-)RNA的複製；第二，RTN3已知參與ER到Golgicomplex的vesicle運輸，這些vesicle可能可以形成病毒複製複合體，因此我們要探討RNA的複製受到抑制，是否由於無法形成複製複合體；第三，利用yeast two-hybrid，我們另外鑑定出數個蛋白分子，我們會進一步瞭解這些蛋白分子在病毒複製所扮演的角色，希望未來可以建立整個EV71複製的分子機轉，也希望建立在國際上有特色的研究。

Project ID:PA9508-1453
External Project ID:NSC95-2311-B182-007-MY3