Molecular Regulation of Chinese Herb Medicine Yin-Chen-Hao-Tang in Experimental Biliary Cholestasis-Induced Hepatic Apoptosis in Rats

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Abstract

膽汁淤積對於肝細胞損傷是一項重要的因素,同時也對肝臟細胞凋亡扮演重要的角色。傳統中醫藥以1) 疏肝解鬱;2) 活血除濕為原則,提供有效與安全的治療。中藥方劑茵陳蒿湯可以改善肝臟膽紅素清除率,改善黃疸現象。臨床文獻報導中國大陸和日本使用中藥方劑茵陳蒿湯治療不同類型的肝疾病,發現其具有利膽與保肝的特性。因此,本計劃藉由膽道阻塞手術的動物模式來探討茵陳蒿湯對於肝臟細胞凋亡與肝纖維化的調控機制。膽道結紮(bile-duct ligation)手術造成膽汁逆流使實驗大鼠產生肝纖維化。術後第1天到第27天,實驗動物在清醒狀態下,連續給予茵陳蒿湯 (50、 100、250 mg/kg body wt, 每天兩次) 胃管餵食或生理食鹽水的餵食。第28天,動物在麻醉狀態下測量血壓、心跳、門脈壓。在測量完生理參數變化後,收取血清做膽紅素,一氧化氮代謝物(nitrite/nitrate)與腫瘤壞死因子(TNF-α)的分析。所有實驗動物皆收取肝臟組織,部分作為病理組織切片,部分則以西方印漬法(Western blotting)對Bax、Bcl-2及爾發平滑肌動蛋白(α-smooth muscle actin)做半定量的測定。並且以反轉錄多鏈聚合酵素反應(RT-PCR)同時分析肝臟組織中轉化生長因子β1、第一、三型前膠原蛋白、組織抑鐵蛋白(TIMP-1)與Fas 、FasL mRNA的表現。同時收集肝臟的均質液分析細胞產生凋亡現象時的重要指標酵素caspase-3 和caspase-8的活性。進一步將肝臟核質萃取物進行electrophoretic mobility shift assay (EMSA) 來測定藥物處理後的轉錄因子nuclear factor-kappa B (NF-κB)的表現。另外,為了進一步瞭解茵陳蒿湯對交互作用的蛋白質網路完整的病理機制的調控,本實驗也將以蛋白質體學(proteomics)對檢體進行研究。透過本實驗的執行,我們期待藉由探討茵陳蒿湯對膽汁鬱滯所引起肝臟細胞凋亡的分子機制調控,同時對茵陳蒿湯在治療過程中對肝臟組織、血清表現差異極大的蛋白質作分類,以嘗試建立茵陳蒿湯對肝細胞凋亡的作用機製圖譜。透過更多的實驗證據來加強我們對茵陳蒿湯在膽汁瘀積所引發肝臟細胞凋亡的療效做評估。

Project IDs

Project ID:PC9508-1889
External Project ID:NSC95-2320-B182-052
StatusFinished
Effective start/end date01/08/0631/07/07

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