Pharmacological and Functional Characterization of Bradykinin Receptors in Cultured Canine Tracheal\heal Epithelial Cells

Bradykinin (BK) 為一典型的呼吸道發炎煤介物, 與過敏性氣喘有關.在呼吸道上,BK可以引起氣 管收縮、肺部及支氣管血管擴張、黏液分泌及 微血管漏失(leakage)作用.此外,BK對native氣管上 皮細胞具有刺激氯離子分泌作用,然而,其刺激 分泌的詳細機轉仍未完全明瞭.我們先前的研 究報告,利用接受體結合測定法(receptor binding assay)及功能性研究證實在狗氣管平滑肌細胞( tracheal smooth muscle cells, TSMCs)上,有B2次級型式( B2subtype)之BK接受體.BK 在TSMCs實際的作用為促 進單磷酸環己六醇 (phosphoinositide,PI)的水解作 用及增加細胞內鈣離子濃度.然而,狗氣管上皮 細胞(tracheal epithelial cells, TECs)上之BK接受體次 級型式分佈的情況,目前文獻上尚無資料.因此, 探討在氣管上皮細胞上之BK接受體次級型式之 分佈狀況及藥理性質可助了解經由BK接受體所 造成的生理反應.本研究的目的在藉由 radioligand [ 3H] -BK binding assay確認培養之狗氣管 上皮細胞BK接受體的性質.探討BK接受體次級型 式是否存在於狗之TECs上,將使用具有選擇 性的 B1及B2接受體作用劑及拮抗劑做為競爭性ligands, 進行[ 3H] -BK結合競爭性抑制作 用之實驗.在功 能性研究上,同樣利用具選擇性之BK接受體作用 劑及拮抗劑刺激TECs,以鑑別可結合PI水解作用 的BK接受體次級型式.此外,本研究將使用BK及其 衍生物探討 在狗TECs中,PI水解作用及其調解作 用,調節因子包括pertussis toxin, cholera toxin, protein kinase C活化物及GTP調節性蛋白質之活化 物AlF4-.本研究計劃之主要目標摘要如下:1.了解 BK接受體在狗TECs上之分佈密度(density)及親和力 (affinity).2.探討存在TECs上之BK接受體次級型式 為單一型或二者同時存在.3.探討存在TECs上,何 者BK接受體次級型式致使磷酸肌醇(inositol phosphates,IPs) 之累積作用.4.了解參與"BK接受體 活化致使IPs累積"反應之G portein的生化性質.

Project ID:PB8501-1101
External Project ID:NSC85-2331-B182-053