Study of the Function of Early Antigen and Viral-Specific DNA Polymerase in EBV Replication

鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma)在中國人的族中 發生的頻率很高,一些實驗證據已經顯示Epstein- Barr Virus(EBV)與鼻咽癌間有著密切的關係.整個EBV 的生活史中,EBV基因所產生的DNA聚合酶(別於寄主 DNA聚合酶)和EA-D這兩個蛋白在溶裂複製(lyticreplication)的過程可能是相當重要.本研究主要在 於探討這兩個蛋白在溶裂複製過程中各自所扮演 的角色.先前的證據表示EBV DNA聚合酶需要在EA-D同 時存在下才能有聚合酶活性.由於EA-D是一種磷酸 化的蛋白,所以EBV DNA聚合酶的活性是否需要EA-D的 磷酸化將首先被確定.此外也將利用缺失突變的 方法,來分析EA-D與DNA和EBV NDA聚合酶結合的部位. 為了得到EA-D和EBV DNA聚合酶的突變株,以利研究. 因此構築一段含有EA-D或EBVDNA聚合酶基因包含一 段抗藥(G418)基因的片斷,將被利用來和正常EBV基 因進行互換,隨後在TPA的誘發下,收集病毒顆粒,再將之感染另一株不帶EBV的淋巴瘤細胞,於G418的篩 選下可得到EA-D或EBV DNA聚合酶的突變株.另外利用 重氮(/sup 15/N)標定正在進行溶裂複製過程的細胞, 收取新合成的片斷進行雜合實驗,將可證實EBV溶 裂複製的方式和複製的方向及速率,運用重氮標 定的方法也可幫助更深入研究EA-D和EBV DNA聚合酶突變株在細胞內的影響.此研究對溶裂複製將有 更進一步的了解.

Project ID:PB8202-1002
External Project ID:CMRP348