The Effects of Anti-HMGB1 and Combination with NO Inhibitor or Antioxidant for Sepsis in Rats

高移動群蛋白質(High mobility groupB1, HMGB1)是近年來有關敗血症研究較具突破性的研究發展中﹐較受矚目的新細胞介質。對於敗血症及全身繫統發炎反應﹐現今醫學界已認為是導因於體內無法調節外來感染所引起的發炎反應。當細菌侵入體後﹐而活化了宿主體內的免疫細胞。體內的巨噬細胞會釋出腫瘤壞死因子﹑介白質1β及6 等﹐這些細胞素均和早期敗血症的變化有關。至於末期的變化﹐其相關的新細胞介質及可能的治療新法一直是醫學界努力找尋的目標。目前我們已知HMGB1 可藉由內毒素﹑腫瘤壞死因子及介白質1等﹐刺激巨噬細胞8 小時以後而產生。此外﹐我們也瞭解小老鼠接受內毒素注射8 至32 小時後﹐血中HMGB1 的值會有意義增加。由於過去多年來﹐除了Activated Protein C 之外﹐大多數可能據治療敗血症的新介質抗體等﹐均無法顯現出其臨床有意義的療效﹐這或許是因其中大多數是作用於較早期敗血症之故。目前HMGB1 仍是被認為除了Activated Protein C 外﹐未來對於治療嚴重敗血症的新利器中較具潛力之可能有效良方。由於一氧化氮也是在末期或嚴重敗血症時才大量被巨噬細胞或內皮細胞釋出﹐因此在敗血症時HMGB1 和一氧化氮之間的調控是前次我們實驗室研究計劃的主要目標。我們研究的結論認為巨噬細胞受內毒素刺激16 小時後﹐均會產生HMGB1 及一氧化氮﹐但HMGB1 則不會受一氧化氮的產生而受刺激﹐其後的實驗是以大白鼠活體的研究﹐以一氧化氮產生刺激物(NONOate)注射後﹐大白鼠血中的HMGB1 並不受影響。其次以Aminoguanidine 給予內毒素注射後的大白鼠﹐則其體內產生的HMGB1 會受到部分的抑制。因此我們觀察到在活體的研究顯示在敗血症時體內HMGB1 的產生無法受到一氧化氮生成酵素的刺激影響。至於最近的結果顯示﹐HMGB1 反之確可以經腹膜巨噬細胞及內毒素而刺激一氧化氮的生成﹐這在以前的文獻上仍無類似的報告﹐本實驗成果已經投稿國外期刊而在審查中。由於累積這些年來的經驗﹐我們今年正以實驗室誘發的HMGB1 的抗體﹐在體外培養實驗中驗證HMGB1 抗體的效價及作用機轉過去半年內﹐我們已經完成以自我合成的HMGB1 抗體﹐在體外腹膜巨噬細胞培養添加內毒素來確認其效果及探討其在內皮細胞上的抑制機轉。過去半年內﹐我們已經完成以自我合成的HMGB1 抗體﹐在體外腹膜巨噬細胞培養添加內毒素來確認其效果及探討其在內皮細胞上的抑制機轉。目前已有不錯的結果。此外我們也將在本系列研究之後加入抗氧化劑(Melatonin)作為混合HMGB1 抗體及一氧化氮抑制劑(Aminoguanidine)等治療嚴重敗血症不同機轉藥物的效果比較。本計劃未來兩年中﹐我們將繼續以大白鼠引發期產生腹膜炎為模式﹐來進一步確認以HMGB1 抗體治療敗血症之活體內實驗效果﹔第二年則將以HMGB1 抗體合併一氧化氮抑制劑(Aminoguanidine)﹐及或抗氧化劑(Melatonin)﹐來比較單一或混合這三種不同機轉的治療效果。我們希望這研究能提供對嚴重敗血症病患更積極有效的治療指標﹐尤其HMGB1 的抑制﹐或將可挽救更多後期嚴重的敗血症病人。

Project ID:PC9408-0620
External Project ID:NSC94-2314-B182-034