以脂肪間質幹細胞轉殖副甲狀腺素(1-34)基因治療副甲狀腺機能低下---白鼠模式

第一年 雖然目前甲狀腺及副甲狀腺手術後發生副甲狀腺機能低下情形不多，副甲狀腺機能低下 病人以vit. D3 及鈣片長期症狀治療，但長期服食用Ca 及vit. D3 不僅生活不便更會引起 便秘及胃液增加之併發症。副甲狀腺素（PTH）（1-84）目前無法長期口服使用，故使用 間質細胞來研究基因治療以解決長期副甲腺低下引起之鈣低下的問題是本研究之目 標。雖然過去二年口服因的研究在本實驗室獲至突破但尚不足以提高鈣至正常情況。 Sprague-Dawley 白鼠（300 克）將用於此試驗，白鼠經麻醉切除副甲狀腺後分成四組， 每組10 隻，第一組將以TheraCyte 置入4 x 106 細胞，第二組將置入4 x 107 細胞，第三 組為控制組，第四組作虛偽手術。利用C3H10T1/2 間質細胞（Mesenchymal cells）做細 胞治療，C3H10T1/2 間質細胞為1973 以C3H 小白鼠胚胎培育成功俱有纖維原細胞狀並 具有間質幹細胞特質。 質體DNA 包含PTH（1-34）基因，以人類細胞巨大性病毒啟動子，以pcDNA3 為載體， 殖株處為Hind III、Bam HI。以大腸桿菌繁殖cDNA，以Lipotamine 2000 （Invitrogen, BioVision, Inc. CA）作轉殖將PTH（1-34）基因置入C3H10T1/2 間質細胞中以反轉錄 polymerase chain reaction 測定並確認間質細胞表現。 以4 x 106 及4 x 107 轉殖細胞置入TheraCyte 中再植入大白鼠為皮下。植入前，及植入後 二星期、四星期、八星期、十二星期及十六星期後檢測血清鈣、磷、副甲狀腺素（1-34） 及白鼠副甲狀腺素，並在十六星期後取出TheraCyte 以顯微檢查其細胞決其存活否，並 作PTH （1-34）免疫組織化學染色。如果能長期存活至三個月並且具有副甲狀腺之功 能將以應用於臨床醫學。 

系統編號:PC9902-1701 
原計畫編號:NSC98-2314-B182-028-MY2