建立高敏感度之磷酸化胜太純化分離系統

蛋白磷酸化/去磷酸化反應在細胞訊息傳遞中扮演重要角色，在此路徑中之任一成員發生功能異常時，即可能造成特定疾病狀態，因此研究磷酸化蛋白體之調控及動態變化，有助於了解其在正常生理功能及特定疾病成因中所扮演的角色，其中的關鍵分子更有機會成為治療標的。然而，由於蛋白磷酸化程度偏低，且在利用質譜技術偵測磷酸化胜肽時極易受到非磷酸化胜肽的干擾而無法偵測。因此，開發一個有效的純化方法，有助於偵測靈敏度的提升。本實驗室基於長期分析大量樣品累積的經驗，發現線上多維分離系統具有極佳的分離效果。因此我們希望能利用這些經驗，建立高效能磷酸化胜肽分離平台。構想上主要是利用一個線上稀釋的設計，串聯不同的分離方法組成高靈敏度的線上多維分離系統。減少樣品在操作過程的流失，以達到最高的樣品回收率。在此兩年的計畫中，我們計畫完成三種系統的建構，包括(1) TiO2/RP-2DLC，(2) SAX/TiO2/RP-3DLC及(3)COFRADIC(組合式對角層析)。預估這些系統將可因應各種狀態之樣品，達到最有效率的純化及偵測效果。並將以模型蛋白及細胞模型進行各系統之效能評估，希望能達到未來分析雷射微選取所得之極微量樣品所需之靈敏度。

系統編號:PC9907-2726
原計畫編號:NSC99-2320-B182-011-MY2