探討攜帶過敏原及免疫分子DNA載體隊氣喘老鼠的作用機制

氣喘病的發生，通常是由於外界吸入性過敏原在呼吸道引起的慢性炎症反應，其特徵常是伴隨著大量嗜伊紅性白血球的浸潤，及對過敏原有特異性之IgE抗體的產生。近幾年來的研究，認為Th2細胞在氣喘的致病過程中，扮演重要的角色。其分泌出的interleukin(IL-5) 可以誘導嗜伊紅性白血球之分化、成熟並延長存活；而IL-4及IL-13則可加強B細胞IgE的產生。所以，若能增進免疫系統中Th1細胞功能，來平衡被致敏動物體中Th2的過度活化，可應用於氣喘疾病的預防與治療。在T輔助細胞的分化方面，細胞素IFN-g和IL-12可促使其分化為Th1細胞，並且抑制Th2細胞的活化。另一方面，T細胞的反應是經由TCR辨識抗原呈現細胞上之抗原-MHC分子，及協同刺激分子的作用來活化。如果可以藉由引進IFN-r、IL-12或抗原呈現細胞上的協同刺激分子來調節對過敏原特有的反應，來抑制過度活化之Th2反應，或許可幫助預防或控制氣喘疾病。在協同分子方面，B7-1曾被指出刺激較多Th1；而B7-2則可刺激較多Th2細胞。近年，DNA疫苗已被應用於許多疾病的預防及治療上，一般而言，DNA疫苗均採用肌肉注射方式，通常會造成疼痛，且需使用大量的DNA載體。本計劃首次提出以非致病性之沙門氏菌作為基因轉殖之工具，來發展口服的氣喘疫苗或治療方式。利用在本實驗室已經建立之雞卵蛋白(chicken ovalbumin， OVA) 為過敏原致敏Balb/c小鼠的氣喘動物模式，來檢測分別能表現OVA，IFN-g，IL-12， B7-1或B7-2基因之沙門氏菌，應用於改善氣喘症狀之可行性、劑量及時機。另外，由於體內抗原呈現細胞已有表現協同刺激分子，本計畫也將測試利用B7-2的anti-sense序列是否可降低B7-2分子的表現，促使T細胞反應傾向Th1。更進一步，以可被Th2-type細胞素-IL-4活化之基因-Stat6或dectin之promoter，來表現免疫調控分子，藉此inducible的系統，來減少因CMV promoter所導致之基因強勢表現，反而導致過度Th1免疫反應之可能性。另外，建構含internal ribosome entry site (IRES) 片段之載體，使其只使用一個promoter，來確保B7-1或B7-2可和OVA分子的一個抗原呈現細胞上共同表現。藉著評估過敏原及免疫調控分子的基因，由沙門氏菌以口服方式帶入被致敏小鼠後之各種免疫反應的變化，不僅可增進對T細胞的活化調控有進一步的了解；結果也可供氣喘病或其他類似機制疾病在治療或預防方面的應用。

系統編號:PG9303-1448
原計畫編號:NHRI-EX93-9110SC