以雞胚蛋之基因轉殖技術提升流感病毒之病毒複製量

以雞胚蛋繁殖流感病毒來製造疫苗已有60 多年的歷史，截至寫此計劃書之時，幾乎所有市售的流感疫苗均以雞胚蛋來生產。以此方式生產的疫苗被公認為較安全。然而，有些人類流感的臨床分離株在雞胚蛋中產量常不佳，因此，有必要發展創新的技術，以提高病毒產量。之前我們發現將hSLU7 的基因(人類調控基因剪接的因子)轉殖入禽鳥類細胞，會增加流感病毒在禽鳥類細胞中的複製力。因為hSLU7(human SLU7)會促進流感病毒M mRNA 的基因剪接，進而增加離子通道蛋白質M2 的產量。一般而言，流感病毒M2 蛋白質在禽鳥類細胞中產生不多，病毒產量亦較低。而當M2 產量被提升時，病毒產量亦被提高。禽鳥類細胞雖有aSLU7(avian SLU7) ，但aSLU7 不會調控MmRNA 的基因剪接。因此，這個計劃擬將hSLU7 基因轉殖入雞胚蛋中，來增加疫苗的產量。這個方法將提供一個先驅性的研究，證明在疫苗產程中，加入能促進病毒複製的基因可提高產值。不僅可用於雞胚蛋，亦可應用於其他研發中的細胞培養產程(例如MDCK 或Vero cells)，用以提高流感疫苗的產量。此計劃的三大目標如下：1. 以RCAS (Replication Competent ALV Long Terminal Repeat with a Splice acceptor)系統將人類的SLU7 基因轉殖入雞胚蛋中禽類病毒ALV(avian leucosis virus)含有env, po1 及gag 將被用來當載體。我們運用ALV 的特性-有很強的宿主分辨性來當載體，因此在整個生產過程中，較為安全。2. 測量hSLU7-轉殖雞胚蛋中流感病毒的產量我們將以溶斑試驗測病毒量。此外，SRID (single radial immune-diffusion)方法也會用來測試HA 抗原含量(此為測量流感疫苗的標準方法)。3. 分析由hSLU7-轉殖雞胚蛋產出的疫苗成份季節性流感疫苗通常為三種：A 型流感H1N1、H3N2 及B 型流感，因此三種病毒株會被打入雞胚蛋中來測試其生產量。

系統編號:PC10110-0055
原計畫編號:NSC101-2321-B182-016-MY2