川崎症之甲基化研究

川崎症好發於五歲以下幼兒，主要以全身性血管炎表現，尤其是會出現冠狀動脈病變，甚至是動脈瘤。現已成為已開發國家兒童後天性心臟病之主要元兇。診斷川崎症的條件是要以下五種條件中的任四項包括：結膜炎、草莓舌或嘴唇乾裂、皮膚疹、四肢手腳水腫和頸部淋巴腫；加上持續發燒大於五天來診斷。截至目前沒有任何一種檢驗指標可以提供早期預測川崎症的感受性，罹病性和其預後，且川崎症的感受性機轉、基因和免疫致病機轉到目前都不清楚。我們希望能找到一些臨床上可以幫忙診斷的指標。我們之前的研究發現屬於適應性免疫反應的週邊血嗜依紅性白血球及Th2反應激素(IL-4, IL-5, eotaxin)在川崎症急性期也會有很高的上升，然而此種增加，卻是保護川崎症病人免於免疫球蛋白治療失敗的重要因素(Pediatr Allergy Immunol 2007)。而週邊血液嗜依紅性白血球及IL-5的增加亦是保護川崎症病童免於形成冠狀動脈病灶的保護因子(Pediatr Allergy Immunol 2009)。進一步也發現免疫調控基因(CTLA-4)的多形性與冠狀動脈病變有關(J Clinic Immunol)。免疫陽性反應Th1(IL-6, IFNr)發炎激素於川崎症病童及動物模式也有明顯上升(PLoS one 2012)，血管內皮相關之免疫發炎因子CD40L也參予其中(Pediatrics 2003)。因此多年來一直認為川崎症是感染性疾病的論點應該會逐漸被釐清，免疫反應於川崎症扮演的地位會比感染來的重要。近期全基因掃描(GWAS)亦發現免疫相關基因CD40, BLK, FC gamma receptor 2A, ITPKC與川崎症的致病及冠狀動脈病變形成有關 (Nature Genetics 2012, 2011, 2008)，連續多篇的自然遺傳期刊報導指出了免疫相關基因的重要性，然而卻尚無法臨床運用，但對於致病機轉的聊解相當有助益。上基因體(epigenetic)改變的程度影響已有多篇研究於糖尿病、心血管疾病及腎臟疾病被報導；但於川崎症至今尚無相關研究報告；我們於FCGR2A的上基因體甲基化已有一些初步結果，發現FCGR2A基因與川崎症致病有相關且該基因之甲基化程度於川崎症病童亦有明顯的低下。居於以上這些結果，我們推論的假說如下：於川崎症病童不同甲基化程度會影響適應性免疫之第一和第二類型T細胞(Th1/Th2)的不平衡反應進一步造成川崎症冠狀動脈病變的產生；為了更了解其他基因甲基化與適應性免疫於川崎症的不同表現形態及其與冠狀動脈病變形成的關聯性，這個計劃在未來三年中，將設定下列三項目標來證明這個假說:一. 利用人類上基因體甲基化晶片來尋找出特殊基因甲基化程度與川崎症冠狀動脈產生病變的關聯性，計畫將會利用我們過去所收案進行基因研究之川崎症病童檢體，尋找除了FCGR2A以外的基因，並且分析不同時期川崎症病童檢體的甲基化程度差別，包含治療前，治療後及恢復期。二. 主要探討由第一年之甲基化基因晶片所得結果基因，利用焦磷酸測序(Pyrosequencing) 進行再確認。並分析不同基因甲基化程度與川崎症病童周邊血之免疫陽性與免疫陰性的變化(包含TH1/Th2/Th17/Treg: 細胞激素 IL-4, IL-5, IL-2,IFN-gamma, IL17, TGF-beta及訊息因子T-bet, GATA-3, Foxp3, IL-17 及 RORrt)的調控及冠狀動脈病變的關聯。包含治療前，治療後及恢復期。三.於體外實驗以川崎症病童的分離單核血球，面對特定免疫刺激物時(乳酸菌細胞壁萃取物LCWE 或 PHA)，具有不同的甲基化程度多型性會表現出影響免疫陽性與免疫陰性的變化(包含TH1/Th2/Th17/Treg)的調控。(如我門發現之FCGR2A基因表現或其他進一步發現之有意義基因功能性研究)這個研究的結果將可以導引出甲基化與川崎病的免疫反應及致病原理。這種免疫致病機機轉的釐清將可提供進一步了解川崎病的感受性基因實際參與疾病的機轉；也可以透過調節或校正異常的甲基化程度而進一步防治川崎病冠狀動脈病變的發生。

系統編號:PC10301-0543
原計畫編號:NSC102-2314-B182-053-MY3