建構受蛋白酶水解產生之快速釋放胜肽數據庫以提升質譜之蛋白質定量效能

利用質譜學技術進行高通量標的蛋白的定量分析，已成為驗證臨床檢體中生物標誌分子的一種重要方法。但目前的定量方法能否準確的定量蛋白，需仰賴該蛋白的代表胜肽是否可被有效的水解釋出、是否可被穩定的保存在溶液中，以及是否可被有效的提取等。此外，蛋白在檢體中的絕對含量也與其能否被成功的偵測息息相關。為了提昇現今質譜定量蛋白質體學技術的偵測靈敏度，本研究將開發一個有效的蛋白質代表性胜肽的富集技術與策略，以克服進樣量的限制，進而提昇設備偵測靈敏度，以強化液相層析串聯質譜技術於大批檢體中快速驗證標的蛋白的分析。本研究的研究目標包括：1.結合化學修飾與強陽離子交換法建立高效能胜肽富集方法，得以高倍率提昇樣品分析的靈敏度。2.優化非還原態蛋白質之水解技術，並結合強陽離子交換富集法，以進一步提高樣品分析的靈敏度。3.建立胜肽之水解釋放速率資料庫，以供建立特定蛋白快速檢測項目之參考。4.建立胜肽定量之多重反應監測質譜分析技術所需的蛋白質代表性胜肽群數據庫，及其最佳化之數據取得參數，作為標的蛋白質譜學定量分析相關研究應用的參考。最後，這些被找到的胜肽將在體液檢體中進行更進一步的測試評估，以確保其實用價值。我們相信，本計畫所研發的樣品處理程序，可使生物標誌驗證的工作事半功倍，而本計畫所建立的蛋白代表性胜肽資料庫也會直接在質譜學標的蛋白的定量分析上提供實值參考價值。

系統編號:PC10907-1565
原計畫編號:MOST109-2320-B182-039