mTOR與NPM/B23之交互作用在雌激素誘導之子宮內膜細胞增生中所扮演的角色

雌激素可經由細胞核之雌激素受體(ER)誘發細胞之增生，也可經由細胞核外(如：細胞膜)之雌激素受體(如：GPR30/GPER1)誘發細胞之增生，一般而言，傳統經由細胞核雌激素受體(ER)之路徑需要較長的時間(24 小時或更久)，而經由細胞核外之GPR30/GPER1 受體誘發之訊息傳遞路徑通常較為快速(5-60 分鐘)，且常受其他生長因子(growth factors)所活化之細胞內之激酶(kinase)訊息分子來加以控制。子宮內膜細胞是雌激素的主要目標細胞之一，雌激素可經由雌激素受體(ER)誘發子宮內膜細胞之增生，也可能經由GPR30/GPER1 受體誘發其他生長因子(growth factors)及其受體(如：IGFR、EGFR…等)所活化之細胞內之kinase 訊息路徑(如：PI3K、Akt…等)來加以控制，繼之引發mTOR 之磷酸化，進而激發nucleophosmin (NPM/B23)之合成，而導致細胞增生。最近，mTOR、nucleophosmin(NPM/B23)、與雌激素三者之間的密切關連性已被明確指出，但這三者之間的關連性在特定細胞所表現之生物功能作用，則尚未被證實。因此，我們擬利用永生性子宮內膜細胞來探討生長因子與雌激素之交互作用，並觀察經由mTOR 及nucleophosmin (NPM/B23)訊息傳導路徑對永生性子宮內膜細胞生長與分化之關係。我們已經於兩年前完成永生性子宮內膜細胞(immortalized endometrialcells)之建立(國科會計劃NSC96- 2314-B-182-016；主持人：王馨世)，過去幾年，我們也有執行訊息路徑研究之經驗【論文發表於Journal of BiologicalChemistry 1998; 273, 4928-4936; Journal of Biological Chemistry 1999; 274,8208-8216; Cancer 2000; 88, 2619-2628；Oncogene 2006; 25:4857-4866】。過去兩年，我們發現有些子宮內膜癌細胞株在雌激素及雌激素拮抗劑(如：Tamoxifen)刺激下，除了會促進細胞之增生外，還會經由GPR30/GPER1 來調控focal adhesion kinase (FAK)之磷酸化，繼而誘發細胞之移行(migration)。在未來三年，我們將利用永生性子宮內膜細胞(immortalized endometrial cells)與子宮內膜癌細胞株繼續執行以下研究，並以臨床檢體(正常子宮內膜細胞檢體、與子宮內膜癌組織檢體)來驗證從永生性子宮內膜細胞觀察到的發現：第一年：探討雌激素與雌激素拮抗劑是否會經由GPR30/GPER1受體調控m-TOR訊息傳導路徑，間接調控nucleophosmin (NPM/B23)之合成與製造，繼而誘發細胞之增生，主要目標是探討：1. 是否雌激素與雌激素拮抗劑會增加m-TOR (Ser2481 及Ser2448)之磷酸化、與m-TOR 下游分子(如：p70S6K)之磷酸化？2. 是否雌激素與雌激素拮抗劑會增加nucleophosmin (NPM/B23)之合成與製造？3. 以siRNA 將GPR30/GPER1 受體knock-down 之後，是否會抵消雌激素與雌激素拮抗劑增加m-TOR (Ser2481 及Ser2448)之磷酸化、與m-TOR 下游分子(如：p70S6K)之磷酸化？4. 加m-TOR 之inhibitor 後，是否會抵消雌激素與雌激素拮抗劑增加m-TOR下游分子(如：p70S6K)磷酸化之現象？5. 加m-TOR 之inhibitor 後，是否會抵消雌激素與雌激素拮抗劑增加nucleophosmin (NPM/B23)合成與製造之現象？6. 以siRNA 將nucleophosmin (NPM/B23) knock-down 之後，是否會抑制雌激素與雌激素拮抗劑所誘發之細胞增生？第二年：探討雌激素受體(ER)調節上皮生長因子受體(EGFR)活化m-TOR之訊息傳遞路徑是否經由PI3K、ERK與Akt之交互作用，主要目標是探討：1. 是否雌激素與雌激素拮抗劑會增加EGFR訊息傳遞路徑分子(如：PI3K、ERK與Akt…等)之磷酸化？2. 加PI3K、ERK與Akt…等之inhibitor後，是否會抵消雌激素與雌激素拮抗劑增加m-TOR (Ser2481及Ser2448)之磷酸化、與m-TOR下游分子(如：p70S6K)之磷酸化？3. 加PI3K、ERK與Akt…等之inhibitor後，是否會抵消雌激素與雌激素拮抗劑增加nucleophosmin (NPM/B23)合成與製造之現象？第三年：探討在雌激素與黃體素所誘導之永生性子宮內膜細胞蛻膜化作用中，黃體素是否可阻斷m-TOR之訊息傳導路徑，主要目標是探討：1. 是否黃體素會阻斷m-TOR (Ser2481及Ser2448)之磷酸化、與m-TOR下游分子(如：p70S6K)之磷酸化？2. 是否黃體素會阻斷m-TOR 之訊息傳導路徑，繼而抑制nucleophosmin(NPM/B23)之合成與製造？黃體素會誘發之蛻膜化作用，是否也部份經由m-TOR 之訊息傳導路徑(如：誘發autophage 路徑分子LC3 及beclin-1)？

系統編號:PC10202-0247
原計畫編號:NSC100-2314-B182-015-MY3