研究細胞週期調控之蛋白激酶之生理功能

肝癌是台灣男性癌症死因之首位，迄今仍無良好之治療方法。極待尋找肝癌獨特之調控機制以發展有效的預防、偵測及治療葯物。我們實驗室過去長期研究人類肝癌細胞之生長調節。最近在一株人類肝癌細胞中發現一個大量表現的新穎蛋白激酶，命名為HsHPK。此酵素在肝癌態織中有過量的表現，同時在細胞週期進行中有非常獨特的細胞位置及活性的改變。但是在細胞中過量表現卻又造成細胞分裂的延緩顯示它可能與有條分的checkpaint 有關。有植物中此酵素的突變會造成花與葉之發育異常。由於此酵素在演化中非常保守，從線蟲、斑瑪魚到老鼠都有。因此本計劃擬利用兩個模式生物系統（人類和老鼠）的生物功能，同時也可以發現一些探討肝癌細胞中獨特之調控系統的線索。本計畫可分為二個部份:第一部份(周成功負責):我們將建立HsHPK 的誘發系統，然後探討HsHPK表現後對（1）細胞週期的影響；（2）瞭解細胞週期中HsHPK磷酸化與活化變化的關係；（3）利用microarray 來偵測HsHPK對基因表現的影響。同時我也將利用反覆使用的yeast twohybrid 去建立蛋白結合網路。最後由於HsHPK在酵母菌中會引發細胞停止生長，我們將利用這個系統去尋找那些人類基因可以回復酵母菌的生長。第一部份(蔡亭芬負責):利用在肝臟特定表現之啟動子來表現HsHPK，然後將單一基因插入特定的染色體位置（Knockin）作成轉殖小鼠。檢查HsHPK對肝臟再生及化學物引發肝癌有無影響。HsHPK對肝臟基因表現的影響也將用microarray去分析。同時我們也將準備一般knockout 及conditional knockout mice 去探討HsHPK對胚胎發育，肝臟再生及化學誘發肝癌的影響。來自不同系統的功能分析資訊將整合起來，以尋找在肝細胞中獨特之調控系統。建立這樣的模式生物合作網路來探討新基因之功能，是“後基因體時代＂台灣發展功能基因體學必須借重的研究組織。

系統編號:PG9403-1338
原計畫編號:NHRI-EX94-9001BL