克雷白氏肺炎桿菌岩藻糖轉移脢基因選殖及蛋白質特性研究 (II)

之前我們的研究發現臨床上引起肝膿瘍(LA)之克雷白氏肺炎桿菌(KP)之莢膜含有很高之岩藻糖成分，此菌在小鼠之毒性非常之高，對照組以由尿道感染之KP菌株(UTI-KP)則不含岩藻糖及在小鼠感染後沒有致死率。此種發現令我們懷疑岩藻糖(人類組織之正常成分)使細菌入侵體內不致受到人類免疫系統的攻擊。而我們以小鼠腹腔吞噬細胞做結合試驗時，發現UTI-KP能和吞噬細胞結合，但LA-KP與吞噬細胞之結合則不多，顯示在菌血過程中UTI-KP能很快的被吞噬細胞清除，而LA-KP則不易被清除，導致在血液中繁殖到很高的濃度，進而侵襲各器官。臨床上之肝膿瘍症狀顯示細菌的趨肝性。在大腸癌之研究曾被報導若表現大量路易斯抗原的癌細胞很容易轉移到肝臟。路易斯抗原即是含表面岩藻糖之多醣體，故若KP含有路易斯抗原，則可合理解釋臨床的肝膿瘍症狀。此種路易斯抗原的形成需靠岩藻糖轉移脢來合成，但KP未曾有過此酵素的報導。我們的初步結果發現LA-KP莢膜含有路易斯抗原，此計畫擬以人類或幽門螺旋桿菌的岩藻糖轉移脢基因序列或蛋白質conserved region設計引子，以聚合脢連鎖反應方式擴大LA-KP基因上的此脢序列、選殖到yT&A載體測定其核酸序列，上網到genomic或plasmid基因庫比對核酸序列，再設計引子將可能的整段含完整coding region以PCR方式擴大出來，轉殖及測定其核酸序列，再轉殖到表現質體、純化此蛋白、分析其酵素活性、做蛋白質結晶、結構分析(與中研院生化所林俊宏教授合作)，並比對此基因的來源。並計劃剔除此基因，檢視突變株對小鼠的毒性，此計劃可了解細菌毒性因子的特性，進而作為設計藥物的標的或疫苗菌株的研發。

系統編號:PC9907-2508
原計畫編號:NSC99-2320-B182-003