成人B 系急性淋巴性白血病基因變異---鑑別具臨床意義的亞型及新突變型蛋白功能之分析

研究背景：B前驅細胞急性淋巴性白血病（B-ALL）約佔成人急性淋巴性白血病(ALL)的75%-80%。過去已知染色體變化決定了ALL 治療成效。具有費城染色體的ALL 代表極高風險的亞型，而成人ALL 以較高的費城染色體發生率著稱。最近，藉由全基因體分析技術，在兒童B-ALL 發現一種新的亞群，其費城染色體陰性，而基因表現圖譜與費城染色體陽性之ALL 病患相似，稱為類費城染色體ALL，其預後很差。此外，具有治療意義的新穎基因變異也被發現存在於類費城染色體ALL 中，進一步促成標靶藥物應用於兒童ALL 治療計畫中。其他新的基因變異，例如CREBBP 突變，也在兒童ALL 被發現，且與較差的預後和抗藥性有關係。成人ALL 的治療成效比起兒童病患遜色很多，而在兒童新近發現的類費城染色體ALL 亞群及具特殊基因變異的亞型，在成人ALL 的發生率和臨床預後仍不明。研究目的：此研究的目的為：(1)建立篩檢類費城染色體 ALL的技術並鑑定其相關激酶異常的亞型在成人B-ALL 的發生率；(2)檢測與B 細胞之發生、分化及細胞週期有關的常見基因缺損；(3)檢測新近發現於高危險級兒童ALL 與重要細胞路徑有關之基因變異，並瞭解其預後意義；(4)分析所發現的CREBBP 突變型蛋白其在體外的生物功能及藥物反應；(5)繪出各基因變異之圖譜(單獨或協同變異)並與成人B-ALL 的臨床特徵和預後作關聯性分析。研究方法：將從 150 位成人 B系-ALL(50 例費城染色體陽性和 100 例費城染色體陰性)初診斷的骨髓細胞萃取RNA 及DNA，以低密度陣列(LDA card)鑑定類費城染色體亞群。再以多重連接探針擴增技術(MLPA)分析是否有IKZF1、PAX5、CDKN2A/B 及CRLF2缺損；以反轉錄聚合酶鏈鎖反應分析是否有ABL1, JAK2 及PDGFRB 之融合基因；以螢光原位雜交偵測IGH-CRLF2 基因轉位現象；基因突變則以次世代定序技術分析再以Sanger 直接定序來確認突變之存在。功能性分析方面，將建構野生型及突變型CREBBP，轉殖至細胞株表現，觀察細胞生長和生存狀況；並利用流式細胞儀分析轉殖細胞凋亡及分化情形；進一步以西方墨點法分析CREBBP 造成細胞凋亡改變之相關蛋白，以及利用共同免疫沉澱法找尋CREBBP 協同蛋白；同時也會以西方墨點法偵測CREBBP 對組蛋白H3 及H4 乙醯化的影響。將以MTT 法檢測給予抑制劑之細胞存活率。重要性：此研究成果將會增進瞭解成人 ALL預後劣於兒童 ALL的基因背景。鑑出具有預後指標及治療意義的基因變異，將可提供酪胺酸激酶抑制劑，JAK 或組蛋白去乙醯抑制劑應用於ALL 治療的機會，預期將可以改善成人B-ALL 療效。

系統編號:PC10309-0117
原計畫編號:MOST103-2314-B182-052