研究轉錄D型肝炎抗原mRNA所須之cis及trans因子

D 型肝炎病毒(hepatitis delta virus, HDV)為一利用寄主細胞RNA 聚合脢而在細胞核內複製之負股RNA病毒。D型肝炎抗原(hepatitis delta antigen, HDAg)為唯一已知功能的HDV病毒蛋白，轉錄此蛋白mRNA 所用之酵素為寄主細胞內之RNA polymerase II (pol II) 。一直以來HDV 領域中一個未解的問題即：HDV 如何改換pol II 的模板認識能力，使原本以DNA 為模板的pol II，可以利用RNA 為模板而合成mRNA。針對此問題一般認為之假說為：HDV 基因體RNA (genomic RNA)上之啟動子(promoter)區域與寄主細胞蛋白形成一聚合體，pol II 經由認識這個聚合體而啟動轉錄；而依pol II 特性推論，最可能的RNA 啟動子為HDAg coding region 之上游序列或桿狀結構。探討此重要問題之瓶頸為缺少可運用之實驗模式來作系統性研究；計畫申請人先前研究HDV RNA 重組(recombination) 時發現一些細胞中分離出之HDV 重組分子組成之全長cDNA clone，雖不能複製，但仍可合成HDAg。這個觀察啟發我依類似概念設計一個真核表達載體，內含0.6-mer 大小之HDV cDNA (nt 889-1679/1-211)，載體上DNA 啟動子將產生基因體RNA，此RNA 再當為模板產生反基因股(antigenome)之HDAg mRNA。這個系統減少了病毒全長基因體複製之過程，而使的研究可專注於轉錄HDAg mRNA 上，將可更明確的探討轉錄HDAg mRNA 所須之RNA 啟動子特性。因此，本計畫之研究目標為:1. 探討轉錄HDAg mRNA 所需之RNA 啟動子;2. 以此RNA 啟動子為餌，以RNA affinity chromatography 及蛋白質體學技術，鑑定出可與HDV RNA 啟動子結合之細胞蛋白;3. 功能分析：以knock down 等實驗，確定與HDV RNA 啟動子結合之細胞蛋白在HDAg mRNA 合成上所扮演之角色。

系統編號:PC10101-1445
原計畫編號:NSC99-2320-B182-004-MY3