尋找平滑肌前軀細胞的細胞表面標記以做為未來純化及臨床應用

在開發中以及已開發國家，動脈硬化和它所帶來的併發症在死亡的原因中佔有重要的角色。每年都有超過數百萬人，因為罹患冠狀動脈或週邊血管阻塞性疾病併有缺氧症狀，且對內科治療無效而須接受更進ㄧ步手術治療。去與這一類疾病抗爭，最好的辦法之ㄧ是遠在疾病發生之前能夠發展新的風險評估生物指標。另ㄧ個辦法是在已經進入嚴重疾病階段的病人，利用新穎的組織工程技術做疾病治療。我們知道血管前軀細胞有不同的型態，其中至少包括平滑肌以及內皮前軀細胞，這兩種細胞之間的抗衡，決定了血管再受傷之後是否走向動脈硬化的命運。因此，這些前軀細胞的評估在預測疾病的風險以及組織工程學上有無可限量的潛力。雖然對於內皮前軀細胞的研究以及其表現型態已經眾所周知，但是對於平滑肌前軀細胞卻ㄧ無所知，特別是它們的細胞表面標記。目前在培養平滑肌前軀細胞是用特殊培養液的自然篩選法則，然而，這個方法仍然會導致和其他不同種細胞型態的混雜及污染，只有了解平滑肌前軀細胞的表面標記，我們才有辦法純化它，進而研究它，最後使用它做組織工程的應用。在這一個三年期的研究計畫中，我們將用先進的科技去尋找平滑肌和內皮前軀細胞的不同基因表現型態，目的是要發展區分兩者之間的方法。然而，使用這一種生物標記來定位平滑肌前軀細胞時，我們需要發展適合細胞流式儀使用的抗體來從混雜的細胞群中專一性的篩選出平滑肌前軀細胞來。最後使用磁場系統，我們將嘗試是否可從病人的周邊血當中，篩選出純的平滑肌前軀細胞，並且可輕易的利用發展出來的方法評估血中循環的平滑肌前軀細胞量以做為臨床風險評估應用。這個三年期的研究包括下各項精髓：1. 利用RNA 點陣法去找出可區分平滑肌及內皮前軀細胞的不同RNA 表現。2. 用Q-PCR 及西方點墨法去確認RNA 點陣法的發現。3. 嘗試用免疫染色法去評估平滑肌內皮前軀細胞是否可表現我們找出的蛋白質（用一種細胞染色及二種動物研究模式來確認）。4. 去研發可供細胞流式儀使用的專一性抗體（為了未來細胞分離用）。5. 測試研發出的新抗體是否可專一性的區分兩種細胞。6. 用磁場系統分離平滑肌前軀細胞。7. 嘗試去評估病人全血當中循環平滑肌前軀細胞的量，並嘗試從全血中分離平滑肌前軀細胞。基於這樣一個前瞻性的計畫，我們已建立了一個團隊，我們的團隊包含了各種專家，包括前軀細胞培養、細胞流式儀執行、共軛焦顯微鏡使用、血管生物學、分子生物學、動脈硬化學以及血液科的專家。目前所有的技術及方法在我們的實驗室中都已成熟並在進行中，我們相信這樣的組合以及經驗，可讓我們找出我們感興趣的標的基因及蛋白質作為平滑肌前軀細胞的細胞標記。這一項工作的完成將在臨床病人風險評估上以及血管的組織工程學上有著無可限量的助益。

系統編號:PC9907-2518
原計畫編號:NSC99-2628-B182-029-MY3