禽流感(H7N9)在人類呼吸道上皮細胞ex vivo Culture 及雪貂動物模式之複製及致病機轉研究---子計畫二-探討禽流感病毒H7N9的聚合脢扮演跨越物種感染之角色(I)

研究計畫: 國家科學及技術委員會(原科技部) 國家科學及技術委員會學術補助

研究計畫-專案詳細資料

摘要

最近在中國出現了起源於禽類流感 H7N9的流感病毒嚴重疫情,證明是禽鳥和人類交叉傳播的結果,該病毒仍具有相當的可能性爆發大流行。直到2013年 11月 15日,世衛組織已經記錄了 139例經實驗室確認的人類禽流感 A(H7N9)病毒感染,其中 45人死亡。人類 H7N9偏愛在較低的上呼吸道中進行複製也使得檢測較為困難。流感病毒聚合酶三聚體包括 PA,PB1,PB2負責催化病毒的轉錄和複製。和大多數 RNA病毒相比,cap-snatching是流感病毒的一個獨特的機制,用以啟動病毒基因轉錄。在此過程中,PA的核酸內切酶從宿主細胞的 mRNA切割出已經 capped的 RNA前導序列,並使用這些序列作為引子轉錄病毒 RNA基因組。從 NCBI下載目前已公布的 91株 H7N9的人流感或禽流感,進行 PA序列比對,發現到某些位置的氨基酸已經由低致病性改變成了高致病性的氨基酸。因此,我們推測,PA序列的改變對於病毒適應宿主或增加毒力可能具有很大的影響。首先,我們將季節性流感病毒 PA以 H7N9 PA取代,測試 RNP活性,以及重組病毒在體外肺上皮細胞的生長動力學和對小鼠和雪貂致病力。然後,我們將找出哪些氨基酸改變有助於 H7N9適應。另外,上呼吸道目前並不是 H7N9主要感染的位置,但對於病毒傳播有著重要的生理意義,我們將利用上呼吸道細胞培養 H7N9病毒,定序整個病毒基因組,藉此我們可以得知怎樣的改變能夠使病毒有更高的機會進行傳播。此外,目前已知 PA具有核酸內切酶活性,且可同時分佈於細胞核和細胞質,和 microRNA的成熟過程十分類似。因此,我們想了解 PA是否會經由水解宿主的 microRNA進而調節病毒的致病性。我們將透過比較肺癌細胞表現 H7N9 PA的野生型或核酸內切酶突變型,使用深度測序的方法比較他們的 miRNA表達譜,接著以 H7N9病毒驗證 microRNA結果,以蛋白質體學方法,探討直接受 microRNA調控的基因。這些具體目標,將使得我們深入了解 PA在宿主適應和病毒致病的作用。

Project IDs

系統編號:PC10304-0016
原計畫編號:MOST103-2321-B182-010
狀態已完成
有效的開始/結束日期01/03/1403/03/15

Keywords

  • 公共衛生學
  • 生物技術(醫)
  • 偷冠作用
  • 核酸內切酶
  • 流感病毒
  • 微小RNA
  • 轉錄作用

指紋

探索此研究計畫-專案觸及的研究主題。這些標籤是根據基礎獎勵/補助款而產生。共同形成了獨特的指紋。