臨床蛋白質體學之質譜分析---定量用之蛋白標準品之製備及分析

利用二維電泳分離輔以膠體染色定量，是定量蛋白質體學的一個主要方法。質譜儀在此所扮演的角色，主要在於蛋白質身份鑑定。但在有適當標準品存在下，質譜儀也具有突出的定量功能。近年來，利用質譜儀定量差異表現蛋白，已儼然成為蛋白質體學研究的一項主流。利用質譜儀定量的原理，主要是藉由安定性同位素標定，將所要比較的兩組樣品，標定不同質量的同位素，如: 1H/2D，12C/13C 等，再將標定後的兩組樣品混合，經過電泳分離、trypsin水解及質譜測量後，最後再以質譜圖中相對標定物之訊號強度比值定量，即可獲得具有差異表現量之蛋白的資訊。對於臨床的檢體，目前只能以化學反應的方式進行標定，才能以質譜儀進行定量。市面上並沒有適當的標準品，可以在樣品不做任何處理的情況下進行質譜定量。本計畫的目的，在於發展出一套同位素標定蛋白標準品的製備方法，針對蛋白的methionine氨基酸進行同位素標定，並保有其原來的化學結構，如此便可以在樣品不須再經化學標定的情況下，進行質譜定量。為克服methionine在蛋白中出現的機率偏低的問題，我們亦將建立專一性純化含有methionine之peptide的系統，及後續配套的質譜分析方法。最後，本分析平台的建立將對臨床樣品中疾病標幟分子的找尋，提供另一種方法學上的選擇。

系統編號:PC9508-1893
原計畫編號:NSC95-2320-B182-056