以腸病毒71型為正股RNA病毒複製機轉之研究模式

我們將研究宿主蛋白分子Reticulon 3 (RTN3)和G protein-coupled receptor 125(GPR125) 在C型肝炎病毒和腸病毒71型複製所扮演的角色。C型肝炎病毒和腸病毒感染細胞後誘導細胞產生一系列的變化：包括誘導細胞內膜發生重組以形成”複製複合體”。目前已知有那些腸病毒蛋白分子參與上述變化，但造成的機轉並未釐清。腸病毒71複製複合體的形成需要病毒非結構型蛋白2C的協助，利用酵母菌雙雜交的技術，我們發現宿主蛋白分子RTN3會與蛋白2C的amphipathic helixregion相互作用，且可以調控病毒的複製 (Journal of Biological Chemistry,282:5888–5898, 2007)。C型肝炎病毒亦為正股RNA病毒，且其NS4B也恰具有amphipathic helix區，與RTN3蛋白都位屬於內質網上。我們利用免疫沉澱分析方法，發現細胞內RTN3蛋白分子會與NS4B蛋白分子有交互作用情形。此外，定量RT-PCR結果顯示，當RTN3蛋白分子在Huh7細胞內被silence時，發現病毒RNA量下降約5倍，說明此蛋白分子在正股RNA病毒複製可能扮演重要的功能。另外，利用酵母菌雙雜交的方法，找出腸病毒71型2C蛋白會與G蛋白偶合受體125 (Gprotein-coupled receptor 125, GPR125)相互作用，並進一步利用螢光顯微鏡及免疫沈澱法證明其相互作用具專一性，又利用siRNA的技術降低GPR125的表現，則病毒蛋白合成會受到抑制，說明GPR125可能與病毒複製有關，基於上述初步實驗結果，我們推測在宿主細胞的GPR125可以調控病毒的複製，未來我們將進一步深入了解其作用機制。首先，確認GPR125與腸病毒71型2C蛋白相互作用的區域；第二，當C型肝炎病毒感染RTN3蛋白silence的細胞，病毒RNA的量有明顯下降的情形，我們需要其他方法再證實RTN3蛋白對C型肝炎病毒(正股RNA病毒)複製扮演十分重要的角色；第三，GPR125對病毒複製的生理意義，GPR125參與病毒複製的作用機轉；第四，利用yeast two-hybrid，我們另外鑑定出數個蛋白分子，我們會進一步了解這些蛋白分子在病毒複製所扮演的角色，希望未來可以建立整個腸病毒71型複製的分子機轉，也希望建立在國際上有特色的研究。

系統編號:PA9808-0187
原計畫編號:NSC98-2311-B182-003-MY3