以人體和病原因素為基準的登革出血熱防治研究-登革出血熱免疫反應異常的分子機轉研究

研究背景與假說:我們先前的研究已經發現登革出血熱的免疫反應有第一型輔助性T 細胞反應較差而且第二型T 細胞反應高(Th1＜Th2)的特性(1-3)，特別是IL-10 較高而INFγ較低的特色(4)，而且與年齡和存在合併症有關(5)。另外，成大醫學院的研究顯示自體免疫反應(6)和吞噬細胞活化症(7)也可能是出血熱的原因。這些都顯示免疫異常反應是其致病性。這種免疫異常的細胞與分子機轉仍不完全清楚?由於登革病毒只對人類造成疾病，所以登革病毒隨著蚊子叮咬人類而進入血中時，會經由白血球或血管上的登革病毒受器感染並且啟動原始(innate)免疫反應，這裡的原始免疫反應會因為所在環境的影響，而作用後續的適應性(adaptive)免疫反應傾向Th2 或Th17 反應而表現出血和休克的併發症。我們假定當具有不同登革接受器體質的人，在不同年齡、病毒型、合併症或因曾經登革感染存在登革抗體的情況下，會啟動異常原始免疫訊息，影響病毒複製，並且誘導適應性免疫反應偏向Th2 或Th17 的方向，而有自體免疫抗體與細胞素活化風暴，促成免疫異常和血管損傷而出現登革出血熱。研究目標: 依據上述假說，這個計劃要執行下列四個目標去驗證這個假說:第一目標是研究白血球或血管內皮細胞在病毒感染時，因為不同基因和環境情況所啟動的原始免疫反應與病毒複製的關係，及其分子機轉。以流式細胞儀同步三色螢光抗體(CD14/IL10/IL12)分析單核球細胞異常活化族群分佈；使用流式細胞儀測定細胞內訊息傳遞，再以西方墨點方法確認； 並且測定單核球細胞異常活化功能細胞素包括：原始免疫力分類:前細胞免疫(Pro-Th1, IL-12/IFNα)，前抗體免疫(Pro-Th2, MCP-1/IL-10)，前調解免疫(Pro-Treg, TGFβ)，前自體免疫(Pro-Th17, IL-6)，和有無DHF臨床表現型的關聯。第二目標則是在不同原始免疫反應的差異下，如何導致適應性免疫反應異常的分子機轉(特別是T 細胞分化成Th1, Th2, Treg 或Th17 作用)，和適應性免疫力細胞素表現的異常。研究登革病毒影響單核白血球分化為樹突細胞（mDC）成熟度，造成不同適應性免疫反應，用RT-PCR 定量T 細胞極化(T-bet/ Gata-3/ Foxp3/ RORrt )轉譯因子mRNA 表現，來看登革適應性免疫反應與血管內皮細胞活化的互動與消長。第三目標是針對登革出血熱特有異常免疫反應，拿病人血漿和白血球來驗證其免疫反應。利用前兩年發現原始和適應性免疫力研究差異，在第三年運用登革熱和登革出血熱病人血漿和白血球，檢驗其原始和適應性免疫機轉。比較其原始免疫細胞異常活化，及其後續影響T 細胞分群、極化和調節免疫機轉的改變。並且在登革出血熱病人白血球加減免疫基因表現，去反證其分子免疫機轉。第四目標是建立大高雄地區登革個案登錄與樣本收集核心:為了進行前瞻性檢驗其感染與免疫反應機轉，我們要設立一個標準化分散式登革登錄與樣本收集核心。以2010年為例高雄有1000 多例登革個案，預期在未來三年可以收集足夠病例與樣本完成前瞻性驗證研究。我們可以取登革熱和登革出血熱患者白血球和血漿去驗證不同基因型、年齡、病毒型、合併症或因曾經登革感染存在登革抗體的情況對病毒量的改變以及免疫功能調整的驗證工作。預期結果:釐清人類登革病毒受器如何啟動原始和適應性免疫力，比較登革熱和登革出血熱病人異常免疫力的分子機轉，對登革出血熱提供可能的免疫防治方法。同時也可以和其他子計畫合作對不同基因型(第一子計畫)、年齡或合併症(第三子計畫)、病毒型(第五子計畫)的免疫致病性比較，和提供第六子計畫推展免疫調節登革出血熱治療指引的參考。

系統編號:PC10007-0352
原計畫編號:NSC100-2314-B758-001-MY3