MLL-PTD 與其他協同基因突變在原發性急性骨髓性白血病之致病機轉(I)

背景：伴隨有 MLL-PTD基因變異的急性骨髓性白血病(MLL-PTD+AML)是一種預後較差的特殊AML 亞型。我們的初步資料顯示，RUNX1 和DNMT3A 基因突變在MLL-PTD+AML 患者發生率很高，且二者大多不會同時存在。而目前對於MLL-PTD 與RUNX1 或DNMT3A 雙基因突變之間的協同生物學功能變化尚不清楚。我們推測，MLL-PTD 與RUNX1 或DNMT3A 基因突變合作導致的細胞生物功能變化，是造成AML的致病機制，且可能經由相同或類似的訊息路徑。目的：本計畫的目標是：1）研究 MllPTD 和RUNX1 雙突變的協同作用，建立雙突變引發AML 的小鼠模式，在AML 病患骨髓細胞驗證標的基因或其產物的表現量，並試驗以特定抑制劑治療後的細胞功能變化；2）研究MLL/MllPTD 和DNMT3A 雙突變在人類AML細胞株及小鼠骨髓細胞的協同作用與AML 發病機制，並找尋基因調控的下游標的，作為生物標記和治療標靶的可能性。材料及方法：經反轉錄病毒或慢病毒轉導將 RUNX1 或 DNMT3A突變質體過度表達在MLL-PTD+小鼠骨髓細胞或人類MLL-PTD+AML 細胞株後，以MTS 法評估細胞增殖、分析細胞群落形成、流式細胞儀檢測細胞分化、檢驗細胞對特異性抑制劑治療後的功能變化。以微陣列分析基因表現和DNA 甲基化狀態，並進行關聯性分析。以RT-qPCR 或西方墨點法在轉化細胞或病患檢體中定量差別表現基因的mRNA 或蛋白質產物。在活體動物模式研究中，將利用MLL-PTD 與RUNX1 或DNMT3A 雙突變的骨髓細胞，植入輻照B6 小鼠進行骨髓移植，也將建立由LSL-tTA/Vav1-Cre 驅動的誘導式MllPTD/WT 和Runx1Mut/WT 雙基因替換小鼠模型，以觀察AML 轉化現象，並做為未來治療藥物之篩選平台。意義：完成此計畫將可瞭解基因和表觀基因(RUNX1 或 DNMT3A和 MLL)突變之間的相互作用，如何調控下游轉錄因子與訊息傳遞，並導致AML。此研究可能有機會發現嶄新的生物標記和治療的標靶。

系統編號:PC10309-0064
原計畫編號:MOST103-2321-B182-015