探討檳榔菸酒之食用習性及microRNA之表現，在口腔癌之癌化過程中可能扮演的角色

口腔癌是世界十大癌症之一，每年約有五十萬人被診斷出罹患此癌。而在台灣，口腔癌的好發率，依衛生署95 年的資料顯示，佔所有癌症之第六位，而在男性罹患癌症中佔第五位，且近年來有逐漸升高之趨勢。正因口腔癌好發在中年男性，許多病人在此年齡層都扮演重要的社會角色，因此對家庭及社會無形中造成相當大的影響。雖然統計學研究指出，檳榔菸酒之食用習性與口腔癌之發生有關，但其細胞分子機制仍未清楚。MicroRNA (miRNA)是一種小片段非轉譯性的RNA，長度約19-25 個鹼基，其作用機制為經由降解轉錄出的訊息RNA 後進而抑制基因的表現。MiRNA 參與多種細胞功能的調控，如細胞分裂增生、分化、凋亡等，也因此被認為與癌化過程息息相關。本計劃即在探討檳榔菸酒之食用習性及miRNA 之表現，在口腔癌癌化過程中可能扮演的角色，以作為未來應用於臨床之學理基礎。本計畫分為四部份，分述如下：一、miRNA 之篩選。利用miRNA 微陣列方式整體性的搜尋並篩選與口腔癌相關的miRNA。目前已有超過500 個人類miRNA 被發現，而我們將取本土克隆之4個正常角質細胞細胞株及6 個口腔癌細胞株，以微陣列晶片全面性的分析這些miRNA。再用Hieraachical clustering 統計分析，比較正常與癌細胞群組間miRNA 之展現異同，並找到最具口腔癌相關意義之miRNA。爾後，將以real-time PCR 之方法，從microarray data 中取得到10 個最具有潛力之miRNA，進一步驗證在第一批之少量病患檢體，即10 位非癌及20 位口腔癌病患組織中，以確認這些miRNA 表現之差異。二、細胞層面之研究。以細胞層面，探討miRNA 在口腔癌癌化過程中可能扮演的角色。為進一步研究miRNA 在癌症發展中之細胞角色，我們將進一步克隆出miRNA 並轉染至口腔癌細胞中，研究其在細胞層面的所造成的變化，包括觀察是否影響細胞之生長、菌落形成、移動及侵犯能力，也將分析細胞週期並了解是否會引起細胞凋亡的現象，以此確認miRNA 在細胞中的功能。三、動物層面之研究。首先建立具備冷光酵素的口腔癌細胞株，並將之轉植至裸鼠體內，以利腫瘤之發生。選取細胞研究結果具意義的miRNA，進一步做動物研究來確認。利用直接DNA 轉載方法，送入miRNA 的質體進入轉植性腫瘤的裸鼠，利用活體影像系統，觀察腫瘤的消長變化，並其癌組織中細胞凋亡之情形，以分析驗證miRNA 在活體癌細胞的功能角色。四、臨床層面之研究。以臨床角度，探討檳榔菸酒之食用習性及miRNA 之表現，在口腔癌癌化過程中可能扮演的角色。我們將選3 種最具口腔癌相關潛力的miRNA，分析第二批數量較多的檢體，含200 位口腔癌病患、100 位癌前病變病患、及100 位一般非癌病患的口腔細胞，探討這些病患miRNA 之表現。此外，所有參與的病患皆會以問卷調查方式，詢問過去檳榔菸酒之食用習性。用統計方式，以一般非癌病患為基準，計算癌前病變及口腔癌症病患，其檳榔菸酒之食用習性及miRNA 之表現，對口腔病變發生之差異，以計算Odds ratio 來評估這些個別因子導致癌症之相對倍率。對癌症病患，將以Person chi-square 或T-test 方法評估這些因子與臨床病理表徵(如TNM stages 等)之相關性，以確立這些因子在口腔癌之癌化過程中可能扮演的角色。

系統編號:PC9801-2482
原計畫編號:NSC97-2320-B182-010-MY3