人類胚胎腎細胞株之快速表現系統開發

由於基因體學與蛋白質體的進步，使得重組蛋白質成為治療與藥物的重要標的；作為臨床前試驗或生物化學與物理的研究時通常需要數個毫克的重組蛋白質，此時一個快速且可以放大的短暫表現系統，如HEK293 細胞搭配非病毒型基因傳遞技術，是非常有用的方式，利用此技術，只要使用一種細胞，配合不同目標基因，在同一套生產設施中，即可快速製造各種具有人類醣修飾特性的蛋白質，此種方式還具有成本低與彈性大的優點。本研究擬利用二年的時間來開發和建立HEK293 細胞株相關的快速蛋白質藥物表現之技術平台。第一年度的研究重點包括質體GFP(green fluorescence protein)的生產與純化系統建立，比較三種非病毒轉染方式(聚乙烯甲胺，PEI)、磷酸鈣與陽離子脂質毫微粒對質體DNA 轉染HEK 細胞的轉染效率，不同化學因子對轉染HEK293 細胞的影響，最後進行非病毒DNA 載體轉染程序的最適化。內容包括質體DNA 的生產與純化系統建立，質體DNA 轉染HEK 細胞方法的評估比較，不同化學因子(甘油或DMSO)對轉染HEK293細胞的影響，最後進行非病毒DNA 載體轉染程序的最適化。第二年度以基因工程方法選殖人類M-CSF 之基因,使用第一年度建立之轉染方式與程序, 以人類M-CSF 之基因轉染HEK293 細胞來生產M-CSF 之蛋白質藥物,並利用二維電泳及質譜儀技術，比較由ＣＨＯ細胞與HEK293 細胞生產之M-CSF 蛋白質藥物之糖修飾之差異。

系統編號:PB9408-4073
原計畫編號:NSC94-2214-E182-008