痛風發炎的訊息傳導機轉

痛風關節炎是一種常見的發炎性疾病，特色是間歇性嚴重發炎，但通常在短時間內緩解。但該發炎的機制至今仍不清楚。尿酸結晶是引起痛風發炎的原因，近年來，尿酸結晶更被發現扮演免疫系統的『危險訊息』的角色。。過去研究顯示細胞激素（cytokine）在發炎的引發及維持均扮演重要角色，其中重要的有interleukin (IL)-1, IL-6, IL-8, tumornecrosis factor (TNF)等。尿酸結晶的刺激至細胞激素產生中的訊息傳遞機制尚未被清楚描述。參考過去的研究，有三個可能的細胞內訊息傳遞路徑：1. 在人體尿酸結晶已被證實多數有IgG 的附著，因此應該可以被FcR 認識，而過去研究顯示吞噬作用多經src family tyrosine kinase 以及ERK1/2 訊息傳導引發發炎反應。然而關於尿酸在此方面的研究卻很少。我們假設尿酸結晶可與Fcreceptor 結合被吞噬而引發訊息傳導。我們將利用共軛焦顯微鏡觀察此一現象，這也是本研究的重點。2. 近來研究顯示toll-like receptor 2/4 以及其胞內附屬蛋白MyD88 在尿酸結晶引起的發炎反應具有相當重要的角色。此反應會活化ERK1/2、NFκB以及AP-1。而增加pro-IL-1 以及pro-IL-18 的產生，引起發炎反應。3. 近年尿酸結晶作為免疫系統危險訊息的機制已被漸次瞭解。NALP-3 上的leucinerich repeat 作為接受器並活化組成inflammasome。該複合體可將pro-IL-1 以及pro-IL-18 處理成成熟IL-1 及IL-18。我們擬以三年時間探討痛風發炎的機轉。我們希望釐清參與各種不同訊息傳導的路徑，及其上下游的調控與交互作用。我們也希望能找出秋水仙素在治療與預防痛風的作用機制。本研究計畫三年的目標分別為：甲、證明尿酸結晶刺激細胞激素產生經由FcR 及TLR 訊息傳導路徑以及此路徑中各層級之訊息傳遞分子。乙、第二年我們將探討FcR 以及TLR 訊息傳遞路徑之間的連結。並研究除了TLR/之外，其他TLR 是否也參與尿酸結晶所引發的發炎反應（例如TLR7/9）。丙、第三年將探討FcR、TLR 訊息傳導路徑與NALP3/inflammasome 之間的交互作用，並尋找秋水仙入在痛風治療及預防的分子機制。第二條及第三條的交互作用較為明顯，但第一與第二、三條路徑之間的關係卻尚待瞭解。單獨一條路徑並不能解釋痛風關節炎的全貌，但若能找出他們的關係，對於痛風疾病的治療將有重要貢獻。我們研究目標如下：第一年1. 我們將製備純化的尿酸結晶並用免疫球蛋白製作覆蓋蛋白的尿酸結晶。利用單核球細胞株證明裸尿酸結晶與覆蓋IgG 的尿酸結晶可經由FcR 及TLR 不同路徑產生細胞激素的產生。2. 使用共軛焦顯微鏡釐清尿酸結晶與訊息傳遞分子（Syk, Fyn, Lyn, Vav, Vbl-b）的相對位置。3. 使用共軛焦顯微鏡釐清含有尿酸結晶的吞噬體與含有TLR 的溶小體的結合。第二年4. 探討TLR 與FcR 的交互作用。A. 使用MyD88 抑制劑確認TLR 在尿酸結晶引起發炎反應的角色。B. 確認Syk 與MyD88 的交互作用。C. 阻斷NF-κB 及tyrosine kinase 如何影響IL-8 分泌。D. 找出尿酸結晶是否可以不經MyD88 引發發炎反應。E. 釐清FcR 與TLR 在痛風的角色。第三年5. 研究雙訊息理論在痛風發炎的地位（TLR 與P2X7 receptor）。6. 研究FcR 與NALP 的交互反應。A. 使用共軛焦顯微鏡確定尿酸結晶與inflammasome 的相對位置。B. 確定Syk 與NALP 的交互作用。7. 找出秋水仙素的治療機制，重點擺在inflammasome 的機制。

系統編號:PC9706-0488
原計畫編號:NSC96-2314-B182-012-MY3