研究受甲狀腺素受體影響基因的調控機制(I)

甲狀腺素(T3)可以調控細胞的生長、分化、發育，它的活性是經由它在細胞核內的受體(TR)，TR 有α型或β型 兩亞型，它是屬於類固醇/甲狀腺受體家族成員, 也是一種激素依賴型的轉錄因子. TR 及其亞型的角色並不明，但從Knock out mice 的結果顯示,他們有不同的角色及功能.長期來,肝臟被認為是甲狀腺素受體的目標器官, HepG2 是一個高度分化的肝癌細胞株,它能分泌15 種血漿蛋白,它並保存了多種肝臟特有的功能,所以合適當作體外模式來研究.在這一計畫中，我們將研究在肝癌細胞中 (HepG2, 表現高量的α型或β型甲狀腺素受體) 受到T3 調控的下游基因. 之前我們利用 核酸微矩陣分析結果, 在T3 處理後7600 個基因中有201(2.6%)個基因受到正向調控.其中有些基因是日後研究的方向. 這將是三年的計劃, 主要在延續之前的研究來探討受到T3 處理後經由TR 受體調控的基因.簡單的說: 1, 我們將對受到受體調控的血液凝結, 過敏, 解毒反應, 及細胞轉移,分化相關基因做進一步研究. 2, 它們的全長cDNA 將用RT-PCR 方式選殖 放進合適的戴體中做不同用途的表現. 3, 將用北方, 西方墨點或定量RT-PCR方式來確定. 4, 它們的啟動子也要選殖, 啟動子的活性要測量, 以使瞭解甲狀腺素調控基因的機制. 最後要利用細胞株及去除甲狀腺老鼠的模式來證實我們的結果. 更進一步我們把受TR 調控基因放進 pCMV-Flag 利用Flag 抗體結合和TR 調控基因反應之蛋白, 再利用質譜儀來確定它的身份, 以便推測TR 調控基因的可能的生理角色. 我們的結果將使我們更明白,甲狀腺素經由它的受體在肝細胞所調控的基因種類及其調控機制.

系統編號:PC9408-2043
原計畫編號:NSC94-2320-B182-052