卵子冰凍前後基因表現的改變

女性卵子的冷凍保存是一項發展中的重要技術。在卵子MII 期冷凍的好處是解凍後可以馬上使用，而不需再經過卵子的體外成熟步驟。目前卵子的體外成熟方式仍有待進一步改善。基本上有兩種方式冰凍卵子－慢速冷凍與急速冰凍（玻璃化），然而，目前解凍後的卵子存活率、受精率及之後胚胎的發育均不理想。我們由先前的研究中，經由比較不同種冰凍保存不成熟卵子的方法時，建立了玻璃化冰凍的方式，希望能延伸到成熟卵子的冰凍。在冰凍的過程中，卵子的許多層面均會受到影響，包括透明層、卵子細胞膜、紡綞體、粒線體及細胞骨架。其中，紡綞體的微管所受的影響很重要，它很容易受到溫度變化的破壞。一旦受到破壞，容易導致染色體不正常的排列，造成將來的胚胎染色體異常。傳統觀察紡緟體的方式是使用螢光染色。這些方法需用到固定的步驟，且僅能提供靜態的資訊。同時，卵子一旦被固定後就不能再作動態的觀察了。近來發展的紡綞體觀測儀可以觀察活的卵子紡綞體，紡綞體觀測儀的原理是利用複雜的電磁光學原理及電腦合成數位影像來觀察細胞中具雙折射性的分子。觀察後的卵子仍可繼續受精發育成胚胎，也因此可以重覆性地評估環境中的影響因子以及作為觀察時間性的序列變化。這個計劃的第一階段，我們將比較紡綞體觀測儀的結果與螢光顯微鏡的結果是否吻合。如果它們的相關性極高的話，之後的實驗可以以紡綞體觀測儀為主要的評估工具，而以免疫染色方式為佐證的工具。在這階段中，我們會使用紡綞體觀測儀來觀察解凍後卵子的變化，以決定解凍後恰當的培養時間。我們初步的經驗顯示Polscope 與螢光顯微鏡的結果相關性極高。由於成熟卵子的冰凍保存對於未來的生殖醫學有極重要的地位，長期冰凍對卵子在基因表現層面所造成的影響是必需要被慎重考慮的。成熟卵子含有許多mRNA，在胚胎基因未開始作用之前，成熟卵子的mRNA 就負起早期胚胎發育的重責大任。文獻上有關冰凍對於卵子或胚胎基因表現的影響研究並不多，而且每次是侷限於數個基因而已。近年來由於微矩陣基因體學的發展我們可以對眾多基因的表現一起篩檢。所以這計劃的第二階段是收集新鮮成熟卵子以微矩陣基因晶片檢驗基因表現。另外收集冰凍解凍後的卵子，以Polscope 評估後，再以微矩陣基因晶片檢驗基因表現，比較冰凍前與冰凍後的差異，並尋求解釋。

系統編號:PC9308-0966
原計畫編號:NSC93-2314-B182-035