氧化壓力與抗氧化物在宿主-病原體交互作用之角色

葡萄糖六磷酸脫氫.(以下簡稱本酵素)是催化產生具有還原特性的NADPH，使胞內之氧化還原之平衡得以維持。缺乏本酵素症，例如蠶豆病症患者分離出來之纖維母細胞會延緩生長，造成加速老化之現象。因此，缺乏本酵素之纖維母細胞是一種可用來研究因內在氧化還原情況時所延伸之生理現象改變之絕佳實驗工具。至於微量營養素，例如葉酸，是否參與調控缺乏本酵素之纖維母細胞的生理功能，迄今倘未有報告。故本研究計畫之重點在於闡明葉酸是否加劇缺乏本酵素纖維母細胞之內部氧化壓力進而導致程式凋亡。果真如此，我們會更進一步探討造成程式凋亡之機制。本研究計劃之重點在於使用雷射掃瞄共軛焦顯微鏡(本儀器)以及各種探針之配合，從事於下列各項之研究:(1) 利用DCF-DA探針，我們將以本儀器偵測細胞內部因缺乏葉酸所促使之活性氧濃度增加。粒線體內的活性氧量將以粒線體特異之染劑(Mito G)加以判別。(2) 胞液及粒線體之鈣離子濃度之變化(葉酸增加及缺乏情況)，將分別以Fluo-4及Rhod-2探針偵測之，同時本儀器得以肉眼觀察其變化(胞液鈣染成綠色螢光；粒線體鈣染成紅色)。(3) 脂質過氧程度之比較將以C11-BODIPY探針觀察之，經本儀器之操作，脂質過氧化可以綠色螢光之強弱比對之。(4) 胞內谷胱甘.濃度之差異將以CMF-DA探針觀察之，經本儀器之操作，胞內量螢光之CMF-硫氫接合物強或弱，即可判別胞內谷胱甘.之多寡。(5) 粒線體之膜電位之變化，可經JC-1探針之監測而得知。若膜電位有改變，則紅色螢光變小，而綠色螢光變強。(6) 葉酸缺乏是否會造成細胞之程式凋亡，我們將以TUNEL方式判別之。如果TUNEL呈陽性，我們將再以DNA階梯分佈之圖譜，加以確認之。本研究計畫之結果將提供闡明葉酸掌控胞內抗氧化系統完整性不可或缺的微量營養素的有力證據。葉酸的缺乏將會導致嚴重的生理傷害。果真如此，蠶豆症患絕對有必要監控其自身之葉酸濃度，以避免突如其來的氧化損傷。故本研究計畫之價值，是具時效性的。

系統編號:PC9708-0344
原計畫編號:NSC95-2320-B182-035-MY2