研究DDX3在病毒/細菌感染及發炎反應中的多重角色

人類DDX3蛋白是DEAD-box RNA解旋酶的成員之一，這類RNA解旋酶在真核生物基因表現上扮演重要的角色，DDX3及其同源蛋白已經被證明參與mRNA代謝的許多層面，包括蛋白轉譯。我們之前的研究發現：DDX3在細胞受到壓力的情況下，會聚集到細胞質的壓力體，暗示DDX3在轉譯調控上扮演角色。DDX3對於一般蛋白轉譯並非必要，但它可以協助具有較長或二級結構5' UTR的特定mRNA轉譯。在轉譯初期，DDX3可能藉由解開特定mRNA的5' UTR二級結構來協助核糖體掃描。最近關於DDX3在抗病毒先天免疫反應的角色逐漸浮現。然而，DDX3在抗病毒先天免疫的真實角色尚未完全清楚。我們最近證明DDX3為PACT蛋白轉譯所必需，PACT是一種雙股RNA結合蛋白，也是RIG-I受器的細胞活化因子，可以協助辨識病毒RNA。在此研究計畫中，我們將提供引人注目的證據首次證明DDX3作用於細菌感染及發炎反應。我們發現在THP-1及HeLa細胞中 DDX3是Stat1、Gnb2、Rac1、TAK1 及 p38 MAPK蛋白轉譯所必需，因為Stat1、Gnb2、Rac1、TAK1 及 p38 MAPK蛋白在先天免疫中分別扮演不同的調控角色，因此我們提議DDX3在病毒/細菌感染及發炎反應中扮演多重角色。為了驗證此一假設，我們在此研究計畫中設計了三個具體目標：具體目標1將研究DDX3在病毒/細菌感染及發炎反應的轉譯調控機制。具體目標2將確定DDX3是否參與巨噬細胞的移動及吞噬作用。具體目標3將釐清DDX3在病毒/細菌感染時引起發炎反應的重要性。為了達成上述研究目摽，標準實驗流程包括：質體建構、細胞培養及轉染、lentivirus病毒媒介RNAi剔除、轉譯分析、位點定向誘變、免疫墨漬法、體外細胞移動分析、體外巨噬細胞吞噬作用分析、流式細胞分析、人類細胞激素晶片分析、酵素聯結免疫吸附測定（ELISA）、定量RT-PCR分析等技術都將被導入，我們預計一年内完成此項研究計畫。

系統編號:PC10708-1126
原計畫編號:MOST107-2320-B182-031