鐸樣受體(TLR)及其調控因子參與膽汁鬱滯性肝損傷機制之研究

膽道閉鎖為原因不明之一種阻塞性膽管炎性疾病，我們新近發表的研究顯示，與氧化性肝損傷相關之8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG)免疫組織染色，在膽道閉鎖早期患者顯著地比晚期和正常人高，且其濃染度與肝臟發炎程度呈正相關。我們先前發表之論文，顯示鐸樣受體(TLR)在膽道閉鎖疾病發生中扮演相當角色。而TLR 訊息傳遞與發炎因子相關。膽道閉鎖為膽汁鬱滯性肝疾病之一，目前當越來越多肝疾病與鐸樣受體(TLR)及其調控因子有密切關聯之際，TLR及其調控因子在膽汁鬱滯性肝損傷扮演之機制，卻仍闕如。本計劃我們打算以三年時間研究TLR 及其調控因子參與膽汁鬱滯性肝損傷之假設，並了解其分子機制。第一年:探討TLR 及其調控因子在膽汁鬱滯性肝之表現與發炎性細胞素以及干擾素相關─(1) 篩選大白鼠發生膽汁鬱滯後，隨時間不同，所有TLR 家族成員及重要訊息傳遞與發炎因子如MyD88, TRIF, IRAK, TRAF 及IRF 等之變化，以定量PCR 測mRNA 之變化，再以Western blotting 及immunohistochemistry 測蛋白質的表現及分佈，並與發炎性細胞素、干擾素表現做一關連性探討。(2) 從肝星形細胞(hepatic stellate cell, 簡稱HSC)，研究與膽汁鬱滯發生後堆積之重要物質如內毒素及膽酸等對TLR 家族名成員訊息傳遞之影響。(3) 探討TLR 之agonist 及antagonist, 如R837 及IRS661(TLR7 ligand& antagonist)對HSC之作用。第二年:發掘及確認TLR 之訊息傳遞調控因子在膽汁鬱滯性肝損傷之角色─(1) TLR 之訊息傳遞，除了受配體(ligands)之刺激，也受到很多負面調控因子如SOCS1,MyD88s, Triad3A, IRAKM, IRAK2c 及IRAK2d 等所左右，故需從in vivo 膽汁鬱滯大白鼠研究其mRNA 及蛋白質的表現。(2) 從in vitro 肝細胞株，利用siRNA 技術研究這些負面調控因子如何左右TLR 之訊息傳遞。第三年:剖析類固醇如何利用其對TLR 之訊息傳遞之影響左右膽汁鬱滯性肝在給予內毒素後之組織變化及大白鼠之生存─(1) 類固醇為膽道閉鎖術後常用藥，尤其發生逆行性膽管炎後， 雖然確有效，但是其機制尚不清楚，故需從in vivo 膽汁鬱滯大白鼠研究其對TLR 家族名成員及重要訊息傳遞因子mRNA 及蛋白質的表現。(2) 類固醇對膽汁鬱滯大白鼠後，再從膽管給予內毒素後之肝組織變化，及大白鼠生存率也一併研究。吾人深信完成此三年期計劃，必然對TLR 之訊息傳遞對膽汁鬱滯性肝損傷機制有更清楚詮釋。對膽道閉鎖複雜疾病之治療，應能提供極富學術價值之訊息。

系統編號:PC9902-0470
原計畫編號:NSC97-2314-B182-010-MY3